[发明专利]一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于特定基因检测领域，具体涉及一种早期非小细胞肺癌多位点关联基因的引物、探针、试剂盒及其制备方法和检测方法。 

背景技术

生物信息学是通过对生物学实验数据的获取、加工、存储、检索与分析，生物信息学成为解开生物数据所蕴含的生物学意义的强大工具。并且随着人类基因组测序完成，蛋白质及肿瘤组织学开展，生物信息学在人类疾病与功能基因的发现与识别、基因与蛋白质的表达与功能研究方面都发挥着关键的作用。生物信息学方法结合生物基因探针技术，通过对全基因表达图谱进行数据挖掘，成功地将临床表征不明或容易误诊的恶性肿瘤准确、快速地区分开。科研人员利用生物信息学的进行深度的数据发掘，比对及分析，发现了基因EGFR(Genbank登录号NM_201284.1)、CHRNA3(Genbank登录号NM_000743.4)、CHRNA5(Genbank登录号NM_000745.3)及ERCC1(Genbank登录号NM_001166049.1)在早期的非小细胞肺癌发病期表达存在着一定的关联性。 

基因探针，一般分成3种。第一种是从DNA基因组中设计，叫做基因组探针；第二种是提取组织中的RNA，利用基因反转录技术得到cDNA,也叫做cDNA探针，它与第一组不同的是不含有样本中的内含子序列，一般认为仅有外显子及有功能的基因序列；第三种就是通过体外人工合成DNA片段与基因序列互补，称为寡核苷酸探针。 

目前研究发现非小细胞肺癌易感性与遗传有着密切的关系，而研究遗传疾病目前国际上公认的手段是SNP位点技术。SNP（Single Nucleotide Polymorphism）单核苷酸多态性是目前最新的遗传标记。SNP的生物体中最普遍，分布最广泛的多态差异。人类HapMap对亚洲人的测序中发现人类基因组中，至少存在三百万个SNP多态位点。根据对早期非小细胞肺癌病人样本SNP研究发现，肺癌的遗传度高达30-40%左右。现代遗传学研究 表明，各种遗传疾病都会被某些SNP位点所表现，也就是关联性。 

市场上现有的肺癌早期预测的试剂盒，大部分都是利用传统的抗原抗体反应原理的Elisa检测试剂盒，存在假阳性比较高。如果采用国外进口的试剂盒，检测样本更是周期长，花费高，而且取材比较繁琐，不能够高通量的大规模的检测，弊病较多。 

对于现有SNP位点分析，常用的方法有大规模的测序技术，基因芯片技术及TaqMan探针技术，但这些技术都存在周期长，费用高的问题。测序及芯片的结果虽然比较可靠，但是对于个别基因的SNP分析存在时间长，人力物力浪费的问题。 

因此，在早期非小细胞肺癌的基因检测领域需要一种检测结果可靠、检测周期短、操作方法简单易行的多位点关联基因的试剂盒及其检测方法。 

发明内容

本发明提供一种早期非小细胞肺癌多位点关联基因的引物、探针、试剂盒及其制备方法和检测方法。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的引物，所述的引物的核苷酸碱基序列如序列表中SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：6、SEQ ID No：7、SEQ ID No：11、SEQ ID No：12、SEQ ID No：16、SEQ ID No：17所示。 

一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的探针，包括5’端探针和3’端探针；所述的5’端探针的核苷酸碱基序列如序列表中SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9、SEQ ID No：13、SEQ ID No：14、SEQ ID No：18、SEQ ID No：19所示；所述的3’端探针的核苷酸碱基序列如序列表中SEQ ID No：5、SEQ ID No：10、SEQ ID No：15、SEQ ID No：20所示，所述的3’端探针的核苷酸碱基序列的5’端添加磷酸修饰，3’端加入荧光修饰。 

上述的引物和探针与检测早期非小细胞肺癌4个相关联基因EGFR(Genbank登录号NM_201284.1)、CHRNA3(Genbank登录号 NM_000743.4)、CHRNA5(Genbank登录号NM_000745.3)及ERCC1(Genbank登录号NM_001166049.1)内部的rs2239680,rs16969968,rs12910984及rs2298881位点的对应关系如下表：