[发明专利]黄芪颗粒指纹图谱的测定方法及其特征指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药指纹图谱分析方法，特别是黄芪颗粒HPLC特征指纹图谱的测定方法以及由此方法所得到的黄芪颗粒的特征指纹图谱。

背景技术

我国传统的中药及其制剂大多缺乏严密的质量标准和科学的检测手段，难以有效的控制其内在质量，不能保证用药的安全、有效，也不符合国际医药市场的要求，严重制约了我国中药行业的发展。加强中药材质量控制研究是中药规范化、标准化的关键问题。只有对中药材进行科学的质量控制，才能保证中药质量，实现中药的“安全、有效、稳定、可控”。

黄芪颗粒收载于《中药部颁标准》，标准编号：WS3-B-2224-96，是黄芪药材全成分提取物，为棕黄色颗粒，该药疗效确切，临床应用广泛，对慢性肾病、心血管系统疾病、糖尿病、肿瘤化疗放疗以及手术后、慢性鼻炎、骨质疏松等疾病具有较好的临床效果。该标准中主要以薄层色谱定性鉴别方法控制制剂质量，目前市场上生产黄芪颗粒的厂家较多，临床需求量巨大，现行的质量控制技术标准已经不能满足黄芪颗粒应用发展之需要。

近年来，关于黄芪颗粒质量控制已有一定研究报道，有学者采用分光光度法建立黄芪颗粒中总黄酮的含量测定方法，四川大学华西药学院对黄芪颗粒中黄芪甲苷和总皂苷含量测定进行了研究，这些研究为黄芪颗粒的质量控制提供了一定参考，具有一定价值。

目前，也有一些采用HPLC建立黄芪颗粒的特征指纹图谱分析方法，比如：

公开号为“CN102353729A”、名称为“一种黄芪药材的质量检测方法”的专利文献中，采用乙腈-水系统作为流动相系统，但得到的指纹图谱中只有7个共有色谱峰；并且其针对的是黄芪药材，而不是黄芪颗粒制剂。

公告号为“CN101327246B”、名称为“黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱”的专利文件中，采用80%-95%的甲醇作为提取溶剂，乙腈-水系统作为流动相系统，其得到的指纹图谱分离度不是很好，只有19个特征色谱峰。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种黄芪颗粒指纹图谱的测定方法及其特征指纹图谱。本发明通过对黄芪颗粒HPLC指纹图谱的研究，提供了一种快速评价黄芪颗粒质量的方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使黄芪颗粒的质量控制技术更为完善、科学。

本发明的技术方案：黄芪颗粒指纹图谱的测定方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取黄芪颗粒粉碎，过筛，称取粉末，加甲醇溶液溶解，超声提取1～2次，每次5～30min，然后冷却，补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；

（3）测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；供试品溶液注入高效液相色谱仪后，以甲醇-0.5%甲酸水为流动相进行梯度洗脱；

（4）用指纹图谱软件对所得的图谱进行处理，即得到黄芪颗粒特征指纹图谱。

前述黄芪颗粒指纹图谱的测定方法中，高效液相色谱测定时的色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.5%甲酸水，A∶B=2%-90%∶98%-10%；流速1mL·min^-1；柱温30℃；检测波长254nm。

前述黄芪颗粒指纹图谱的测定方法中，供试品溶液的制备过程为：取黄芪颗粒粉碎，过60目筛，精密称取粉末1.0g，加入10%甲醇溶液10mL溶解，超声提取5min，然后冷却，补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

前述黄芪颗粒指纹图谱的测定方法中，对照品溶液的制备为：取减压干燥至恒重的毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素对照品，分别加入甲醇，制成每1mL分别含0.562mg毛蕊异黄酮苷、0.254mg芒柄花苷、0.357mg毛蕊异黄酮、0.274mg芒柄花素的对照品溶液。

前述黄芪颗粒指纹图谱的测定方法中，步骤（3）中分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5-20μL，优选为10μL。