[发明专利]一种快速制备羟基酪醇的新方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物化学有效成分提取纯化技术领域，涉及的是一种制备高纯度的羟基酪醇的工艺方法。

背景技术

羟基酪醇，又名3,4-二羟基苯乙醇，英文为Hydroxytyrosol，是一种天然小分子多酚化合物。它于1950年在狭叶松果菊中医松果菊苷的形式被发现。油橄榄叶中也存在羟基酪醇但含量甚微，约在0.2%-0.7%之间。由于表现出诸多的生物活性如抗氧化、抗炎、抗癌(前列腺癌和乳腺癌等)、保护心血管疾病、降血糖、修复软骨损伤或抑制肥胖等。尤其是其抗氧化性，羟基酪醇被认为是最具有清除自由基的天然抗氧化剂之一，其对细胞损害的自由基清除率是槲皮素的2倍，表儿茶酸的3倍之多，因其非常有效的生物活性，可以广泛用于食品、药品和化妆品领域，并且广受市场的欢迎。由于天然植物中存在的羟基酪醇含量较低，从大多数文献的报道发现有关羟基酪醇的制备主要是通过橄榄苦苷的水解得到。此外，从国内外研究报道中发现，从油橄榄叶或油橄榄叶提取物水解制备羟基酪醇，主要是通过盐酸和β-葡萄糖苷酶作用制备羟基酪醇，而使用碱液水解尚未报道。而本专利，正是通过强碱水解橄榄苦苷制备羟基酪醇，再中和，乙酸乙酯萃取，萃取液旋蒸浓缩后加适量的水稀释，再通过大孔树脂和葡聚糖凝胶色谱，可得到HPLC纯度大于90%的羟基酪醇。由于前面水解的时间缩短，其效率得到提高，提高企业的生产效率，减少了其生产成本。

首先，从国内专利看，专利CN101662956A是通过pH=1~3的盐酸水解，反应时间多则7至8h,且最后的羟基酪醇的收率仅约为80%，前期水解的时间过长，不利于企业的生产周期的缩短。专利CN1665764A也是通过酸加入植物液，使橄榄苦苷转化羟基酪醇，其转化时间至少2个月，导致生产周期变长。专利CN101624607A通过多酚氧化酶将酪醇转化成羟基酪醇，所需转化的时间超过1h。专利CN101973853A油橄榄叶水提液加入浓盐酸pH=1，煮沸时间也达3h。

发明内容

本发明的目的在于解决高纯度羟基酪醇的生产工艺时间长、效率低的问题，缩短生产周期。

本发明所采取的技术方案包括如下：

(1) 碱水解：称取适量的油橄榄叶提取物，加入适量碱浓度，固液比为1:10~1:45(w/v)，水解温度为25~120℃，水解时间为10~90 mins，进行水解反应，反应后冷却至室温，再加入适量的酸液中和，所述的碱溶液为NaOH和去离子水的混合液，酸液为HCl或者稀H₂SO₄。

(2) 离心：将上述(1)的酸碱中和后的收集液在3000~6000r/min，5~20mins，进行离心。

(3) 分离纯化：将(2)离心后分离收集液加入萃取剂收集液体积的1/3，萃取3~5次，旋蒸回收乙酸乙酯，再加入适量的去离子水溶解稀释，先经过大孔树脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液洗脱，旋蒸回收乙醇，收集的含羟基酪醇的水溶液最后再通过葡聚糖凝胶，再用1-8倍柱体积的1%~60%乙醇-水溶液洗脱，旋蒸回收乙醇，得到含高纯度的羟基酪醇的水溶液。

(4) 干燥：将(3)最后收集到的含高纯度的羟基酪醇水溶液，进行真空冷冻干燥或者喷雾冷冻干燥，可得到含羟基酪醇90%以上的浸膏。

步骤(1)中所述的碱浓度为0.05~5mol/L的NaOH水溶液。

步骤(3)中所述的萃取剂为乙醚、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的任意一种。

步骤(3)中所述的收集液在30℃~50℃进行旋转蒸发回收溶剂，使用大孔树脂洗脱液物3~5倍柱体积的，乙醇-水溶液为10%~65%。葡聚糖凝胶的洗脱液为5%-45%的乙醇水溶液；其中，大孔树脂的类型是DM-8、DM130、AB-8、 HPD450、HPD100、HPD722和X-5中的一种，葡聚糖凝胶的类型是LH-20或Sephadex G-25中的一种。

步骤(4)中所述的真空冷冻干燥的时间为8~11h，或喷雾冷冻干燥的时间为1~2h。干燥的温度最大不超过25~45℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果：1、本发明采用碱性条件作用先水解，再用酸中和，使pH=7，在强碱作用下，橄榄苦苷快速分解，提高了羟基酪醇得率。同时缩短产品的生产周期，提高企业的生产效率。2、对羟基酪醇的纯化采用，大孔树脂和葡聚糖凝胶双重树脂纯化，使羟基酪醇的含量进一步得到提高。3、本发明工艺稳定，产品收率高且重现性好，产品品质好，易于工业化生产。

附图说明

图1 本发明提供的工艺流程图