[发明专利]利用诱导固化作用的耐砷细菌原位修复砷污染土壤的方法

权利要求书

1.一种利用诱导固化作用的耐砷细菌原位修复砷污染土壤的方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、选用砷污染严重地区土壤置于带盖的灭菌瓶中，将土壤样品置于营养肉汤锥形瓶中，营养肉汤pH为8-8.5，砷含量为100 mg L^-1,然后将锥形瓶置于转速为130 rpm min^-1 ，温度为30℃的条件下培养48 h，得到菌液；

b、将培养得到的菌液分别依次接入砷含量为100 mg L^-1、250 mg L^-1和500mg L^-1的营养肉汤培养基中，按常规方法分离得到耐砷细菌，该耐砷细菌在基因库的代码为CR5，编号为HQ331532；

c、然后将耐砷细菌CR5置于质量含量为2%的尿素酶、20- 60 mM L^-1 CaCl₂和砷含量为100- 500 mg L^-1的营养汤培养基中，将混合液置于转速为130rpm min^-1 ，温度为30℃的条件下培养5-7天，富集得到钙化作用耐砷细菌CR5菌液，所得到的菌液pH为8-9；

d、将富集得到具有钙化作用耐砷细菌CR5菌液100-300 ml与50-100g含砷量为200-600 mg Kg^-1的污染土壤进行混合，形成混合溶液，混合液pH呈现微弱碱环境至pH为8-9，将混合溶液置于湿润环境下培养7-15天后终止实验，钙化作用耐砷细菌CR5通过钙化作用将富含砷污染土壤中砷得到固定，砷污染土壤得到原位修复，阻止其向周围土壤及地表或地下水中迁移。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b和步骤c中选用的营养肉汤培养基为蛋白胨10g L^-1、牛肉膏1.5g L^-1、酵母粉1.5g L^-1和氯化钠5g L^-1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中选用的污染土壤为高盐环境下的砷污染土壤，砷污染环境为其土壤中重金属为可交换状态，且与碳酸盐相互结合，包括砷污染土壤、铯污染土壤、铜污染土壤、铅污染土壤。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤d中形成混合溶液中的菌液菌密度为10⁷-10⁸CFU/ml。