[发明专利]一种适于水稻杂交种真实性鉴定的SSR指纹图谱构建方法

权利要求书

1.一种适于水稻杂交种真实性鉴定的SSR指纹图谱构建方法，其特征在于，该方法的步骤依次包括水稻杂交种及其亲本种子基因组DNA提取、对所述基因组DNA进行SSR-PCR扩增及高分辨率熔解曲线分析、针对前述SSR-PCR扩增及高分辨率熔解曲线分析结果，利用GeneScan 软件进行SSR指纹图谱构建。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因组DNA提取步骤是以水稻杂交种及其亲本种子为材料，于苗期取幼嫩叶片采用CTAB法提取DNA，取部分DNA溶液测其浓度，稀释至10 ng/μL，于-20℃保存备用。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SSR-PCR扩增及高分辨率熔解曲线分析步骤是：

PCR扩增程序条件为：95℃预变性10 min，然后按 95℃变性15 s、62℃~53℃每循环下降 1℃，退火 15 s、72 ℃延伸 20 s 的程序进行 10个循环，再按照95℃变性15 s、53℃退火15 s、72℃延伸20 s的程序进行 45个循环；

扩增产物的高分辨率熔解步骤在 PCR 循环结束后立即进行，其程序为：升温至95℃ 1 min，降温至40℃ 1 min，然后再升温至60℃，从60℃连续升温至95℃过程中，每升高 0.05 ℃，收集荧光 1 次，最后降温至 40 ℃；

PCR反应和高分辨率熔解曲线分析程序在满足每步升温0.02~0.1℃的实时荧光定量PCR仪上完成。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，杂交种及其亲本的SSR指纹图谱构建步骤是：

用GeneScan软件进行数据分析，生成水稻杂交种及其亲本种子扩增片段高分辨率熔解曲线的归一化和差异图谱，建立SSR指纹图谱，该图谱用于杂交种及其亲本的鉴别。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述SSR指纹图谱中，水稻杂交种与其亲本种子都有其特异的曲线图谱，能将水稻杂交种与其亲本种子区别开来。