[发明专利]MgCl2胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法

权利要求书

1.一种MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，采用茂原链霉菌为发酵菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中经液体发酵制备谷氨酰胺转氨酶，其特征在于：在发酵培养基中添加MgCl₂，发酵96 h提高链霉菌谷氨酰胺转氨酶的产量。

2.根据权利要求1所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述发酵培养基中添加0.1-0.2 mol/L的MgCl₂。

3.根据权利要求1所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的具体步骤如下：

用5mL无菌生理盐水将培养7d的斜面孢子洗下，接种于100mL种子培养基中，30℃、200r/min培养48h后，按10%的接种量添加到发酵培养基中，在初始发酵培养基中添加0.1-0.2 mol/L MgCl₂，30℃、200r/min条件下采取提高谷氨酰胺转氨酶产量的培养方式培养，将培养好的发酵液经板框过滤器过滤或压滤，再经0.22 μm滤膜的微过滤装置过滤，制成无细胞的酶液，添加经烘干灭菌的载体保护剂充分混溶，制成干粉或医药级酶制剂。

4.根据权利要求3所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述载体保护剂为以无细胞的酶液计蔗糖1-2%，海藻糖3-5%，甘油3-6%。

5.根据权利要求3或4所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述载体保护剂经100℃、1小时烘干灭菌，无菌条件下与无细胞的酶液充分混溶。

6.根据权利要求3或4所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述保护剂与无细胞酶液充分混溶，再经0.22 μm滤膜的微过滤装置过滤除菌。

7.根据权利要求3所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于采用低温喷雾干燥或冷冻干燥制成干粉。

8.根据权利要求7所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述低温喷雾干燥的条件为进风温度80℃，出风温度55- 60℃；冷冻干燥采用真空冷冻干燥机干燥，冻干机冷井温度为-60℃，真空度为0.05MPa。

9.根据权利要求3所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于通过超滤、凝胶层析、离子交换层析、透析后再经冻干制成医药级酶制剂。

10.根据权利要求9所述的MgCl₂胁迫提高茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于所述制备医药级酶制剂的具体要求如下：

（1）超滤：

将上述的无细胞酶液进行超滤，超滤条件为采用截流分子量为30kDa的超滤膜，将无细胞的酶液浓缩为初始体积的1/5；

（2）凝胶层析：

将浓缩液加入到预先用50 mmol/L、pH 6.0磷酸盐缓冲液平衡的Sephadex G75层析柱中，并用相同缓冲液进行洗脱，流速为0.25 mL/min，检测波长为了280nm，收集有活性的部分；

（3）离子交换层析：

将收集到的全部活性部分加入到预先用50 mmol/L、pH 6.0磷酸盐缓冲液平衡的SP sepharose High Performance层析柱中，用含0-0.25mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为3 mL/min，检测波长为了280nm，收集活性部分。