[发明专利]一种定量测定血液循环DNA的方法无效
| 申请号： | 201310072035.1 | 申请日： | 2013-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN103146826A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 宋现让 | 申请（专利权）人： | 宋现让 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定量 测定 血液循环 dna 方法 | ||
1.一种定量测定血液循环DNA的方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)取1ml同一个肿瘤患者外周静脉血，置于EDTA抗凝管中，10℃-20℃静置4小时，2000g离心5分钟，取上层血浆100ul-200ul，加入相同体积的缓冲液，充分混匀，95℃静置5-10分钟，16000g离心10分钟，取上清液为模板直接用于定量PCR扩增；
(2)取10ul上述处理后的血浆DNA，加入90ul的0.5×缓冲液稀释10倍，再取10ul稀释后的血浆DNA，加入90ul的0.5×缓冲液再稀释10倍，依次稀释下去，制备出不同稀释倍数的血浆；
(3)分别取2ul不同稀释倍数的血浆直接进行定量PCR扩增，取PCR体系共20ul，包括快速复活热启动DNA聚合酶1ul、SuperGreen染料1ul、2x混合物10ul、终浓度为300nM的引物4ul以及H2O4ul；95℃5分钟；95℃5秒，60℃20秒，72℃20秒，重复45个循环；
(4)得出Cp值为23.51±0.03，26.87±0.03，30.45±0.12。
2.根据权利要求1所述的定量测定血液循环DNA的方法，其特征在于，所述2x混合物包括2x反应缓冲液、终浓度为3mM的氯化镁、三磷酸脱氧核苷。
3.根据权利要求1所述的定量测定血液循环DNA的方法，其特征在于，所述三磷酸脱氧核苷包括终浓度均为0.4mM的dATP、dCTP、dGTP和dTTP。
4.根据权利要求1所述的定量测定血液循环DNA的方法，其特征在于，所述不同稀释倍数的血浆的稀释倍数为1∶1、1∶10或者1∶100。
5.根据权利要求1所述的定量测定血液循环DNA的方法，其特征在于，进行定量PCR扩增使用ROCHE LightCycler480定量PCR仪。
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