[发明专利]抗体与微珠连接方法

权利要求书

1.抗体与微珠连接方法，其特征是包括以下步骤： 

1）、抗体与核苷酸交联：

A、抗体的修饰与脱盐：

25～100μg免疫球蛋白稀释成浓度为2～8mg/mL后与SANH均匀混合后，于20～30 ℃的摇床中孵育修饰2～6小时，SANH与免疫球蛋白的摩尔比为10～70： 1；

将所得的抗体修饰产物经洗涤、离心过滤，以除去多余的SANH；得脱盐后的抗体修饰产物； 

B、核苷酸的修饰与脱盐：

用pH 7.0～7.6的磷酸缓冲液将核苷酸稀释至6～12 mg/mL，加入SFB均匀混合，于20～30 ℃的摇床中孵育修饰2～6小时，SFB与核苷酸的摩尔比为10～70：1；

将所得的核苷酸修饰产物经洗涤、离心、过滤，以除去多余的SFB；得脱盐后的核苷酸修饰产物； 

C、修饰后抗体与核苷酸的交联与纯化

将脱盐后的抗体修饰产物和脱盐后的核苷酸修饰产物按照1:8~12的摩尔比均匀混合，于2～8 ℃充分反应8～24小时，

将所得的交联后产物经洗涤、离心、过滤，除去游离寡核苷酸并进行脱盐；得纯化后的抗体—核苷酸交联体； 

2）、抗体—核苷酸交联体与微珠作用：

微珠先经洗涤液洗涤，然后静置；

将1～9×10^-11 mol biotin修饰的核苷酸加入5～15 μl 的Neutravidin包被的磁珠，于20～30 ℃的摇床孵育10～30分钟，接着用洗涤液洗涤；随后加入上述5~10×10^-13 mol纯化后的抗体—核苷酸交联体，在6×SSPE缓冲液（pH 6.0）条件下于20～30 ℃的摇床孵育1～4小时，再用洗涤液洗涤；得微珠体系；

所述洗涤液为将BSA用PBS溶液（pH 7.4）稀释至质量浓度为0.1~0.5 %而得 。

2.根据权利要求1所述的抗体与微珠连接方法，其特征是：

将所得的微珠体系进行如下步骤：

在Cy3标记的荧光二抗或转基因蛋白中加入微珠体系，在20～30 ℃条件下摇床孵育1～4小时；接着用PBS（pH 7.4）洗去未结合的荧光二抗或转基因蛋白，最后用荧光显微镜观察结果。

3.根据权利要求1或2所述的抗体与微珠连接方法，其特征是：

所述步骤1）A中：摇床的转速为50～150转/分；用pH 8的0.1 mM 的EDTA溶液进行洗涤；

所述步骤1）B中：摇床的转速为50～150转/分；用pH 8的0.1 mM 的EDTA溶液洗涤；

所述步骤1）C中：将所得的交联后产物用pH 8的0.1 mM 的EDTA溶液洗涤。