[发明专利]一种结核分枝杆菌CFP10抗原蛋白串联重组表达方法及其在结核检测中的应用

权利要求书

1.一种编码结核分枝杆菌CFP10的密码子优化基因序列，其特征在于：其单拷贝核昔酸序列CFP10c1如SEQ ID NO.1所示，2次拷贝串联核苷酸序列CFP10c2如SEQ ID NO.2所示，3次拷贝串联核苷酸序列CFP10c3如SEQ ID NO.3所示，4次拷贝串联核苷酸序列CFP10c4如SEQ ID NO.4所示，5次拷贝串联核苷酸序列CFP10c5如SEQ ID NO.5所示，6次拷贝串联核苷酸序列CFP10c6如SEQ ID NO.6所示，CFP10基因串联次数包括但不限于1－6次。

2.结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白，其特征在于：它由权利要求1所述的密码子优化基因序列编码，其单拷贝氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，2次拷贝氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，3次拷贝氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，4次拷贝氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，5次拷贝氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，6次拷贝氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，CFP10蛋白串联次数包括但不限于1－6次。

3.结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白的表达载体，其特征在于：将权利要求1所述的密码子优化基因序列分别插入到质粒pET-16b上，得到重组质粒CFP10c1-pET16b、CFP10c2-pET16b、CFP10c3-pET16b、CFP10c4-pET16b、CFP10c5-pET16b或CFP10c6-pET16b，载体包括但不限于pET16b。

4.一种表达结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白的工程菌株，其特征在于：它含有权利要求3所述的表达载体，其宿主菌为大肠杆菌（Escherichia coli）。

5.一种基于权利要求2所述的结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白建立的体外检测结核杆菌感染的化学发光法试剂盒，其特征在于：利用权利要求2所述的结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白，刺激受检者的外周血释放γ-干扰素，并通过化学发光方法测定γ-干扰素的变化，诊断是否感染结核分枝杆菌。

6.一种基于权利要求2所述的结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白建立的体外检测结核杆菌感染的TCELL-SPOT试剂盒，其特征在于：利用权利要求2所述的结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白，刺激受检者的外周血T淋巴细胞，并通过ELISPOT方法测定斑点形成的多少，诊断是否感染结核分枝杆菌。

7.权利要求2 所述的结核分枝杆菌CFP10串联重组融合蛋白在制备单抗、多抗、检测试剂盒及蛋白芯片中的应用。