[发明专利]一种利拉鲁肽的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种利拉鲁肽的合成方法。

背景技术

随着生活水平的提高和生活方式的改变，近年来，我国糖尿病的发病率有逐年增加的趋势。糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子作用于机体，导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等问题，继而引发机体糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。糖尿病分为妊娠期糖尿病、特异性糖尿病、I型糖尿病和II型糖尿病。其中，II型糖尿病又名非胰岛素依赖型糖尿病，特点是人体自身能够产生胰岛素，但细胞无法对其作出反应，使胰岛素的效果大打折扣。

II型糖尿病主要通过口服或皮下注射降糖药治疗。针对II型糖尿病的降糖药种类很多，包括二甲双胍、磺脲类药物和胰高血糖样肽-1（GLP-1）的受体激动素等，GLP-1的受体激动素是近年来研究的热点。其中，利拉鲁肽（liraglutide）是GLP-1的受体激动素之一，2010年1月25日，美国FDA批准由丹麦诺和诺德公司研发的利拉鲁肽（商品名为Victoza）注射剂在美国上市，2011年3月4日，利拉鲁肽获得SFDA批准上市。利拉鲁肽的化学表述为Arg³⁴Lys²⁶-[N-ε-(γ-Glu-(N-hexadecanoyl))]-GLP-1^7-37，分子式为C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁，相对分子质量3751.2，CAS登记号为204656-20-2，分子式如式I所示，与天然GLP-1相比，药效相当且作用时间更长。

式I

目前，利拉鲁肽主要采用基因重组技术和逐步偶联的固相合成方法进行制备。采用基因重组技术合成利拉鲁肽时，技术难度较大，成本相对较高，同时由于Arg³⁴-GLP-1（7-37）-OH的侧链处于未保护状态，与N^α-hexadecanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反应时会产生较多的杂质，不利于纯化；采用逐步偶联的固相合成方法进行利拉鲁肽制备时，由于利拉鲁肽的序列中有较多的疏水氨基酸，逐步偶联时树脂收缩严重，反应不完全，导致收率偏低，同时粗肽中与产品性质相近的杂质较多，纯化比较困难。因此，提供一种利拉鲁肽的合成方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种利拉鲁肽的合成方法。该方法通过将二肽片段、三肽片段或其组合与氨基酸、Gly-树脂偶联合成利拉鲁肽，提高了粗肽的纯度和收率，有利于纯化，缩短了合成时间，适合工业化生产。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种利拉鲁肽的合成方法，包括如下步骤：

获得二肽片段和/或三肽片段；

获得Gly-树脂；

取二肽片段、三肽片段或其组合与氨基酸、Gly-树脂偶联，得到肽树脂，经侧链修饰、裂解、纯化、冻干，即得；

二肽片段为Gly-Arg、Leu-Val、Trp-Leu、Ala-Trp、Ile-Ala、Phe-Ile或Ala-Ala；

三肽片段为Trp-Leu-Val、Ala-Trp-Leu、Ile-Ala-Trp或Phe-Ile-Ala；

肽的序列如SEQ ID NO.1所示。

作为优选，组合为Gly-Arg、Leu-Val、Ala-Trp、Phe-Ile或Ala-Ala中的任意两者或两者以上二肽片段的组合。

Gly-Arg、Leu-Val、Ala-Trp、Phe-Ile或Ala-Ala中的任意两者或两者以上二肽片段的组合具体为：

Gly-Arg和Leu-Val的组合；

Gly-Arg和Ala-Trp的组合；

Gly-Arg和Phe-Ile的组合；

Gly-Arg和Ala-Ala的组合；

Leu-Val和Ala-Trp的组合；

Leu-Val和Phe-Ile的组合；

Leu-Val和Ala-Ala的组合；

Ala-Trp和Phe-Ile的组合；

Ala-Trp和Ala-Ala的组合；