[发明专利]转基因大豆MON89788转化事件的检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及转基因植物检测领域，特别涉及用于检测生物样品中是否存在转基因大豆MON89788转化事件的方法和试剂盒。 

背景技术

在农业或工业上通过遗传操作成功地向植物中引入在商业上感兴趣的性状是一个依赖不同因素的复杂过程。根据国际农业生物工程应用技术采集管理局(ISAAA)统计，自转基因产品商品化以来，转基因农作物的种植面积已经超过了10亿公顷。而中国成为第六大转基因作物增长国。随着各国对转基因产品的管理和人们对转基因产品安全性的关注，世界各国纷纷出台相关法规政策，要求对转基因产品进行标识。 

转基因大豆MON89788品系经过改造后，是可以抗Roundup除草剂中的活性成分-草甘膦的一种转基因品系。抗草甘膦的大豆是通过在其基因组内插入草甘膦抗性的元件——烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因而起到抗除草剂的性状，此酶是从土壤农杆菌菌株CP4中分离出来的，简称CP4EPSPS。EPSPS是草莽酸途径中的一个重要的酶，这个途径参与了植物芳香类物质以及芳香族氨基酸的合成。草甘膦通过抑制EPSPS活性阻断芳香族氨基酸的合成，最终导致受试植株的死亡。从土壤农杆菌菌株CP4中分离出来的CP4-EPSPS，具有抗草甘膦的特性。而在哺乳动物体内没有合成芳香族氨基酸的途径，所以这种酶对人体无害。 

MON89788型转基因大豆是由美国孟山都公司开发成功的。MON89788大豆已大面积种植并在市面上流通。但由于生物安全性的考虑，以及各国法律的相关规定，要求对含这种转基因大豆成分的产品在标签中予以注明，以具有可追溯性。 

马尔文等发表了关于大豆事件MON89788和检测它的方法(中华人民共和国知识产权局.公开号：CN101252831A.公开时间：2008年8月27日)。所述方法基于PCR检测技术，通过测定MON89788外源DNA区与5’或3’侧翼区的连接区域(转化体特异性检测)的存在来确认转基因事件MON89788的存在。上述检测方法需要依赖昂贵的仪器，并且，由于其扩增产物为DNA，为了防止DNA造成的实验结果相互污染的问题，在设计实验室场地时，常需要将样品提取、样品扩增和样品检测分布到不同的房间，并且需要严密谨慎小心的操作，这就增加了试验的复杂性。因此，需要开发一种高效、准确、灵敏且简便的检测方法。这对于国家的进出口贸易、转基因安全性以及对于海关、商检、出入境检验检疫部门、食品加工部门来说都是至关紧要需要解决的一个问题。 

发明内容

本发明提供了一种检测转基因大豆MON89788转化事件的方法，该方法包括以下步骤： 

(a)将样品DNA95℃变性后立即冰置，使用特异性识别MON89788外源DNA区的特异引物对，在RNA聚合酶的作用下转录生成RNA；所述引物之一包含所述RNA聚合酶的识别序列； 

(b)使用上述特异引物对，对上述所得RNA进行NASBA扩增，得RNA扩增产物； 

(c)分别设计捕获探针和检测探针，对上述RNA扩增产物进行检测。 

所述“外源DNA区”是相对于受体植物内源性DNA区的概念，包括MON89788的植物基因组中侧翼于TDNA(包含转基因的转化DNA)插入的5’末端的基因组DNA的一部分。所述MON89788外源DNA区具有SEQ ID No.1所示核苷酸序列。 

在具体实施例中，所述RNA聚合酶为T7RNA聚合酶，所述T7RNA聚合酶的识别序列为SEQ ID No.2所示的T7promoter序列。 

本发明所述引物对优选引物长度为18-28bp，GC含量为30％-40％，扩增长度为120-450bp，Tm值在57-62摄氏度的引物对。 

优选地，所述引物对分别包含SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示核苷酸序列，特异性识别MON89788外源DNA区内的5’末端基因组序列。 

在具体实施例中，所述引物对分别为如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的核苷酸序列。SEQ ID No.5所示序列的5’端含有与捕获探针序列具有至少90％相似性的核苷酸序列；SEQ ID No.6所示序列的5’端包含T7RNA聚合酶的识别序列。