[发明专利]一种合成四甘氨肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种四甘氨肽的合成方法，属于化学合成技术领域。

背景技术

双甘氨肽用作生化试剂，在生物研究及医药上用作血液保存和蛋白质药物细胞色素C水针剂的稳定剂。三甘氨肽是合成肾功能显像药物的主要原料。四甘氨肽为四个甘氨酸分子通过肽键有序链接而成，它和三甘氨肽、双甘氨肽都在多肽及药物合成方面得到重要应用，四甘肽是合成抗凝血酶药物比伐卢定的一个重要短肽，见专利CN201110170669.1，CN200910028793.7，CN 200980152943.3。

目前，双甘氨肽的合成采用甘氨酸在甘油中高温脱水,经碱水解,酸中和,酒精结晶得产品,此方法中，作为综合用的甘油中加了水不可套用,后序处理产生氯化钠,对于作为成品使用对杂质要求较严,很难合格。三甘氨肽采用氯乙酰氯与双甘氨肽在碱性条件下反应再氨解获得,但此工艺控制单杂很难达到0.2%。四甘氨肽主要采用Z-GLY-GLY-OSU与GLY-GLY的酯在有机溶剂中缩合反应，再氢解得产品，此反应中因Z-GLY-GLY-OSU的溶解性不好,收率较低,且双甘氨肽要酯化又需在有机溶剂中反应，成本相应较高。

发明内容

本发明的目的，是克服上述技术的缺点，提供一种合成四甘氨肽的方法，该方法采用多种保护组合的循序合成方式,在合成双甘氨肽时，乙二醇可套用，后序处理不产生氯化钠，产品合格率高；在合成三甘氨肽时，可确保产品单杂0.2%以下，纯度99.0%以上(HPLC)；在合成四甘氨肽时，反应物溶解性好,收率高，且酯化无需在有机溶剂中进行，成本低。技术方案是：

一种四甘氨酞的合成方法，采用循序合成法，其步骤为：

1、甘氨酸缩合开环后生产双甘氨肽；

2、双甘氨肽与经N-保护的甘氨酸活化酯缩合，脱保护后生产三甘氨肽；

3、三甘氨肽与N-保护的甘氨酸活化酯缩合，脱保护后生产四甘氨肽。

所述合成双甘氨肽的具体步骤是，取乙二醇、甘氨酸，混合搅拌，升温至170-175℃反应，反应完全后，加水冷却至室温，离心得粗品，再加入盐酸水解,冷却离心得固体，加入氢氧化锂溶液调节PH5.5-6，加入活性碳脱色，加入酒精过滤得双甘氨肽粗品，再用水重结晶,加入酒精,过滤洗涤至氯合格,干燥得双甘氨肽。 或

取乙二醇母液、甘氨酸，混合搅拌，升温至170-175℃反应，反应完全后，冷却至室温，离心得粗品，粗品加入2N氢氧化锂水溶液于30-40℃保温30-60分钟,用盐酸中和PH5.5-6.0，加入活性碳精制脱色，加入酒精过滤得双甘氨肽粗品，再用水重结晶，加入酒精，过滤洗涤，干燥得双甘氨肽。

所述合成三甘氨肽的具体步骤是，将水、 甘氨酸混合，用4N氢氧化钠水溶液维持PH=9-10，保持温度5-10℃，滴加入氯甲酯苄酯，滴加完后自然升温反应，至氯甲酸苄酯反应完全，加入乙酸乙酯，用盐酸中和PH2.2-2.5，搅拌结晶，离心洗涤，烘干得Z-甘氨酸；再加入乙酸乙酯、HOSU、 DCC，于25-30℃反应，至苄氧羰基甘氨酸本反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液，滴入双甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中，于室温反应，至Z-GLY-OSU反应98％以上，在反应终点分出乙酸乙酯层，再用乙酸乙酯提取上层杂层，用盐酸中和PH=2.2-2.5，搅拌离心得Z-gly-gly-gly-OH,用乙酸乙酯/正已烷重结晶，烘干得Z-三甘氨肽纯品；再将Z-三甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C 混合，搅拌下通入氢气，保持压力0.1-0.Mpa，于30-40℃氢解，待氢解完全，过滤得三甘氨肽与Pa/C 混合物，此混合物加入水，升温溶解，过滤回收Pa/C，滤液浓缩，加入酒精，过滤得三甘氨肽。 或