[发明专利]超声酶解制备肝素钠制备方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种肝素钠技术，尤其是一种复频组合超声强化双酶提取肝素钠技术背景技术。

背景技术

    目前我国生产几乎全部采用猪小肠为原料，在常规反应器内运用盐解法、  碱解法和酶解法等几种，其中盐解法应用最为普通，其生产工序是：原料(肠  黏膜)、常规反应器内盐水提取、过滤、树脂吸附、洗脱、乙醇沉淀、脱水、干  燥、肝素钠粗品。

    上述方法生产肝素钠的工艺过程虽然比较简单易于实现，但存在的不足之处在于过程的精致，因为粗品肝素钠经反复的酸碱处理，不仅会使肝素钠的收率减少，而且对肝素钠的生物活性也影响很大，尤其效价很难达到90USPu／mg以上，并且时间较长。

  发明内容

    本发明的目的是在于提供一种双酶法提取肝素钠的制备方法，利用双酶组进行酶促提取肝素纳，通过选择酶的种类、酶组合的比例、超声场的强度、控制好时间以及其他几道工序制成肝素钠。

    该方法采用以下步骤：

   一种超声酶解制备肝素钠制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

    (a)、将刮制好的小肠粘膜抽入常规酶解罐，在加温前先加入重量比为2，3％-2．8％的精盐，调PH值到9．0-9．2；将刮制好的小肠粘膜抽入复频超声反应罐，复频超声条件为20+40kHZ，选择超声强度在0．1W／m²到0．9W／m²；

    (b)、将步骤(a)中的溶液加温到40℃-45℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶，并且使其比例在10：0．5到10：5之间，双酶在步骤(a)中溶液的重量比为0．3％-0．4％，继续加温到50℃-55‘C，保温酶解2h-5h，然后继续加温到80℃-85℃，保温10-20分钟后过滤；

    (c)、对步骤(b)中的过滤溶液进行吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水干燥常规步骤后获得肝素钠产品。

    所述的步骤(b)中，所选择的胰蛋白酶和脂肪酶的优选比例为10：2。

   本发明与现有技术相比，具有如下优点：

    1、整个工序的时间减少了大概33％；

    2、产品的收率提高了29．6％；

    3、效价稳定在120以上(国内先进技术产品效价90-0)。

  具体实施方式

    实施例1

    制小肠粘膜(10副小肠)，每根小肠与水混合后约4-6公斤，将刮制好的小肠抽入常规酶解罐，在加温前先加入2．3-2．8％(体量)的精盐，调PH值9．0-9．2：在42℃时加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例为10：2)，占总溶液重量比为0．4％；继续加温至52℃，保温3小时后进行酶解，然后继续加温到80℃-85‘C，保温15分钟后过滤，对上述步骤中的过滤溶液进行吸附：吸附水过滤，冷却到58’C时加入树脂吸附；洗涤：收集树脂，清水漂洗数次，再用清水加温58-60‘C，调PH到7。5，到树脂洗干净为止，用1．2N盐水溶液，调PH到8加入树脂中，加温到60℃，洗涤0．5h，去处洗涤溶液，滤干树脂；洗脱：用4M的NaCl溶液洗脱2次后，将两次洗脱溶液合并，过滤：沉淀：将一、二次洗脱液用85％的乙醇沉淀，体积比例是1：1．5左右，兑好后的酒精混合液浓度大约是30-40度，沉淀后脱水干燥得肝素钠产品。