[发明专利]含有副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原的副猪嗜血杆菌病正向间接血凝诊断试剂及其制备方法

权利要求书

1.副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原，具有序列表中SEQ ID No：2的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原的基因。

3.根据权利要求2所述的副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原的基因，其特征在于，所述基因具有序列表中SEQ ID No：1的核苷酸序列。

4.含有权利要求2或3所述的基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。

5.表达副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原的方法，其特征在于，是将含有权利要求2或3所述的副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原基因导入宿主细胞，表达得到副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，构建所述重组表达载体的出发载体为pET-30a；所述宿主为大肠杆菌BL21。

7.含有权利要求1所述副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白抗原的副猪嗜血杆菌病正向间接血凝诊断试剂。

8.副猪嗜血杆菌病正向间接血凝诊断试剂的制备方法，其特征在于，是将表达得到副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白纯化后进行复性，将纯化复性的OppA重组蛋白稀释为6-20mg/ml，之后与等量的5%醛化-鞣酸化绵羊红细胞悬液混合，在37℃水浴中感作30分钟，期间每10分钟振摇一次，离心弃去上清，沉淀用pH7.2，浓度0.1mol/L的PBS悬浮，以3000rpm离心2分钟，洗涤2次；再用含1%灭活健兔血清的PBS悬浮，PBS的pH为7.2，浓度为0.1mol/L，以3000rpm离心2分钟，洗涤1次；最后将沉淀用含1%灭活健兔血清的PBS稀释成1%的致敏红细胞悬液，PBS的pH为7.2，浓度为0.1mol/L，分析检测合格即为副猪嗜血杆菌病正向间接血凝诊断试剂。

9.根据权利要求8所述副猪嗜血杆菌病正向间接血凝诊断试剂的制备方法，其特征在于，纯化后的副猪嗜血杆菌OppA重组蛋白，其复性过程为，以磷酸盐缓冲液配制的浓度为8mol/L、6mol/L、4mol/L、2mol/L和0mol/L的尿素溶液进行透析复性，尿素溶液pH均为6.0。