[发明专利]一种用于B细胞抗原表位筛查的多肽阵列合成技术

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽阵列合成技术，尤指一种用于B细胞抗原表位筛查的多肽阵列合成技术。 

背景技术

在后基因组时代，科学家已经把研究重心从基因组研究转向蛋白质功能研究，从分子整体水平对蛋白质的组成及其活动规律等生物学功能进行研究，并探索人类健康和疾病的奥秘，即蛋白质组学。对蛋白质与蛋白质或其他物质(如核酸、多糖、化学物等)相互关系的研究是蛋白质组学中的关键热点，而多肽技术正是这关键研究热点的核心技术之一。 

多肽阵列是一种新型生物芯片，是后基因时代揭示各种疾病和生化现象的最直接的研究技术。通过该技术平台的软件设计系统和自动化设备，可以将任意设计的氨基酸序列一多肽，在经过特殊处理的芯片上予以高密度地原位合成，每张芯片可承载几千个甚至更多的原位合成多肽。该阵列技术可以根据已知蛋白的氨基酸序列，按序列漂移原则在芯片上原位合成多肽氨基酸序列，或者也可以根据待测物质的结构任意合成氨基酸序列，并将这些多肽按一定次序高密度地排列在芯片上，然后将测试物质(如抗体、血清、靶蛋白等)和芯片反应，经过免疫或反射等检测技术发现与测试物质有结合反应的位点/域；同时，结合反应的数据可以输入计算机进行三维结构处理，从而寻找到蛋白质与测试物质的结合部位。另外，该技术可以根据目标蛋白质设计多肽抑制物或激动剂，使得新药发现的过程大为缩短。多肽阵列技术被认为是后基因组时代与 基因芯片、蛋白芯片相蓖美的新型蛋白位点检测技术，而在疫苗、药物、诊断试剂等研发领域具广阔的应用前景。 

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种高密度、高通量、可同时测定上万个多肽相关相互作用的合成技术。 

本发明是一种用于B细胞抗原表位筛查的多肽阵列合成技术，包括以下步骤： 

1)多肽芯片的合成，具体包括： 

1.1多肽微阵列芯片上的多肽合成：用半自动合成仪吸取足量的氨基酸活化溶液点印于纤维素膜上，进行多肽点合成反应； 

1.2多肽微阵列芯片合成中侧链钝化； 

1.3多肽微阵列芯片合成中每层Fmoc保护基团的去除； 

1.4多肽微阵列芯片合成过程中的染色； 

1.5重复1.2至1.4步骤继续合成多肽微阵列芯片，按照预先设定的程序，直至多肽合成完成； 

1.6将完成最后一层氨基酸合成的多肽微阵列芯片膜置于-20℃冰箱保存或直接进行下一步反应； 

2)多肽侧链保护基团的去除； 

3)多肽芯片的杂交反应。 

所述步骤1.1中的的氨基酸活化溶液的配制方法为： 

1)配制氨基酸激活剂：以DMF为溶剂，配制0.5M DIC溶液； 

2)配制各种氨基酸储备液溶液：以DMF为溶剂，配制0.5M HOBt溶液， 再将配制好的0.5M的HOBt溶液作为溶剂分别配制不同种类的Fmoc保护氨基酸，使溶液达到浓度为0.5M的氨基酸储备液； 

3)配制氨基酸激活溶液：用步骤1)中配制0.5M的DIC氨基酸激活剂和步骤2)中各种氨基酸储备液溶液以1∶1的比例混合，所得溶液即浓度为0.25M的氨基酸激活溶液。 

所述氨基酸激活溶液配制后室温静置15min以上使用。 

还包括步骤4)多肽微阵列芯片的再生。 

所述步骤1.2多肽微阵列芯片合成中侧链钝化的方法为：在多肽微阵列芯片合成每一层结束后，纤维素膜正面朝下置于玻璃平皿中，用钝化溶液I完全浸润10min后，弃去钝化溶液I，加入钝化溶液II，再次静置10min，弃去钝化溶液II，将纤维素膜正面朝上，加入DMF溶液，再震荡洗膜6次，每次2min，所述钝化溶液I为2％乙酸酐的DMF溶液，所述钝化溶液II为含2％酸酐、2％二异丙基胺的DMF溶液。 

所述步骤1.3多肽微阵列芯片合成中每层Fmoc保护基团的去除方法为：多肽微阵列芯片合成中侧链钝化后，将纤维素膜放入新的玻璃平皿中，加入去Fmoc保护基团溶液后震荡反应去除Fmoc氨基保护基团，此步骤重复两次，每次10min，之后用DMF溶液震荡洗膜6次，每次2min；再用无水乙醇震荡洗膜两次，每次2min，室温晾干，所述去Fmoc保护基团溶液为含20％Piperidine的DMF溶液。