[发明专利]一种沉默小鼠seps1基因的siRNA

说明书

技术领域

本发明涉及一种siRNA，具体而言涉及一种抑制seps1基因表达的siRNA及其制备方法。

背景技术

RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由小干扰RNA(smallinterferingRNAs，siRNAs)引起的转录后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing，PTGS)，广泛存在于生物体中。RNA干扰技术可用于基因功能研究及生物遗传改良等多方面用途。自2001年Tuschl等证明合成的双链siRNA在哺乳动物细胞中可实现靶基因特异沉默作用后，siRNA因其特异性、高效性以及作为基因治疗药物的巨大潜力而备受青睐。

作为基因治疗工具，siRNA与传统反义药物相比更加具有高效、特异等优势。此外，siRNA还可进行多元化改造，如可以通过与细胞特异性启动子及可诱导系统结合，实现组织特异性基因沉默，因此具有广阔的应用前景。研究表明RNAi技术可大大缩短从鉴定靶基因到认识其功能的时间，促进了在药物发现过程中对已知靶基因功能的高通量分析，还加快了对药物特异性及其作用机制的评估，以便较快地筛选出候选药物分子。

siRNA的有效性和优势在神经系统疾病、炎症、代谢疾病(肥胖症，高胆固醇血症)、肿瘤、感染性疾病等的体内治疗实验中已得到初步证实。siRNA技术是在不破坏或不引起遗传物质改变的情况下对相关基因进行转录抑制的，因此可更完整地阐明该基因的功能。更重要的是，在人类疾病的治疗方面，siRNA可与靶基因序列之间产生特异性结合，发挥最佳的治疗效果，而且也不会产生明显的不良副作用。可以预见，一旦siRNA在体内的稳定性、有效性、靶向性等瓶颈问题得到解决，RNAi技术在临床的应用必将产生质的飞跃。

人类seps1基因位于染色体15q26.3，包含6个外显子，编码一个有189个氨基酸的蛋白质。15号染色体的这个区域以前被认为包含影响炎性疾病的数量性状遗传位点(quantitative trait loci QTLs)，这些炎性疾病包括胰岛素依赖型糖尿病，Alzheimer’s病和腹部疾病。这样，SEPS1有可能是炎症相关疾病多样性的功能因素和位置因素。

近来的研究结果显示SEPS1与炎症细胞因子的产生存在直接的联系，可能在炎症介导的疾病以及一些其他的免疫异常中起主要作用。许多常见疾病的发生机制都包含了免疫系统的激活，例如糖尿病，肿瘤和心血管疾病。新近的研究显示炎症反应持续作用的结果是导致这些疾病的发生。细胞暴露于应激条件下会激活免疫，由此导致循环中促炎症因子水平升高，这与Selenoprotein S1(seps1)基因下调相关。

SEPS1在保护内质网功能完整性以抵御潜在的代谢应激中的重要作用是最近才明确的。SEPS1被分类为一个新的内质网膜蛋白，参与错误折叠蛋白质由内质网向溶酶体的清除，在溶酶体中通过蛋白酶体进行遍蛋白化和降解。SEPS1也调节细胞氧化还原平衡并保护内质网免受氧化应激的有害作用。功能受损的内质网对这些副作用的反应是诱使一些基因表达，这将导致转录因子NF-κB的活化。活化的NF-κB进入细胞核，激活那些编码促炎性细胞因子的基因转录。seps1在2002年被识别，Northern blot分析显示seps1mRNA表达于肝脏，骨骼肌，脂肪组织，下丘脑，睾丸，心脏和肾脏。seps1在3个主要胰岛素靶组织中高表达：肝脏，脂肪，和骨骼肌，提示其在调解胰岛素活性和/或糖代谢中的可能作用。

通过细胞裂解和免疫组织化学研究，Gao等人定位SEPS1蛋白在人类肝细胞的细胞膜和微粒体上。培养的肝肿瘤细胞中seps1基因表达的过度会导致胰岛素抵抗，包括葡萄糖摄取下降，糖原合成减少，以及磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)胰岛素依赖性降低的弱化。慢性炎症在许多常见疾病中都有病理作用并且受基因和环境因素的双重影响。炎症反应增强，促炎因子的高分泌或者是抗炎分子的减少这些进化中的有利面，会导致慢性炎症状态，例如肥胖，II型糖尿病和心血管疾病，给现代社会增加负担。然而，上调seps1基因可能是解决这些疾病的新希望。