[发明专利]一种制备奈西立肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的制备奈西立肽的方法。

背景技术

奈西立肽(Nesiritide)，由Suhoh于1988年从猪脑组织中分离出来，是内源性利钠家族的重要成员之一，主要由心脏分泌。其结构与心钠素相似，具有利钠、利尿、扩张血管和抑制肾素分泌等作用，主要用于治疗心力衰竭等，适用于患有休息或轻微活动时呼吸困难的急性失代偿心力衰竭患者的静脉治疗，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肽药物。

奈西立肽的结构为：

关于奈西立肽的制备方法，国内外均有报道，US5114923以一种基因工程的方法制备奈西立肽，US20080287650报道以固相合成的方法制备奈西立肽。

中国专利CN200910104860.9和CN200910104861.3报道了一种固相制备和纯化的方法；CN201110171152.4报道了一种Ser-Ser-Ser-Ser片段的方法制备奈西立肽。

发明内容

在长肽合成中现有的固相合成容易产生缺省肽等副产物，大部分缺省肽性质与目的肽相似，导致难纯化、收率低。

本发明的制备方法是通过低替代度的氨基酸树脂、小片段和不同侧链保护基来减少缺省肽的产生，提高粗肽纯度，有利于纯化，提高收率。

本发明提供一种制备奈西立肽的方法，包括：

1)Fmoc-His(R1)-载体树脂；

2)固相合成法制备线型奈西立肽树脂

R3-X-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(Trt)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-Ser(R2)-Ser(R2)-Ser(R2)-Ser(R2)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(R1)-载体树脂；

3)线型奈西立肽树脂裂解得到线型奈西立肽；和

4)将线型奈西立肽氧化得到奈西立肽；

其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氮原子相连。

优选地，本发明方法还包括纯化奈西立肽的步骤。

具体实施方式

对本发明中所用缩写及其含义说明如下：

本文中，“替代度”指的是单位量的树脂负载的物质的数量，单位为“mmol/g”。

本文中，如无相反说明，则所述反应在常温常压下进行。

本发明中的宽泛的、优选的、更优选的、和最优选的定义和范围可以相互组合。

本发明提供一种制备奈西立肽的方法，包括：

1)Fmoc-His(R1)-载体树脂；

2)固相合成法制备线型奈西立肽树脂

R3-X-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(Trt)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-Ser(R2)-Ser(R2)-Ser(R2)-Ser(R2)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(R1)-载体树脂；

3)线型奈西立肽树脂裂解得到线型奈西立肽；和

4)将线型奈西立肽氧化得到奈西立肽；

其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氮原子相连。

优选地，本发明方法还包括纯化奈西立肽的步骤。

在一个具体实施方案中，R1为Trt或π-MBom。

在另一个具体实施方案中，R2彼此独立地为Trt或Mmt。

在又一个具体实施方案中，X为Ser(tBu)-Pro。

在又一个具体实施方案中，R3为Fmoc、Boc或H。

本发明中“肽”是指类似地通过多肽合成中的Fmoc固相合成方法得到的偶联产物。

对所述载体树脂无特别限定，只要其具有可与物质中的羧基进行反应的活性位点且不与所述物质中的其他基团反应即可。所述载体树脂优选为2-CTC树脂或王树脂两类，树脂替代度为0.2-1.2mmol/g，优选为0.5-1.1mmol/g，更优选为0.6-1.0mmol/g。

本发明所用王树脂类的结构如下：