[发明专利]一种贴壁分选卵巢肿瘤侧群细胞的方法

权利要求书

1.一种贴壁分选卵巢肿瘤侧群细胞的方法，其特征在于，不需要酶解消化过程，细胞直接在贴壁的状态下进行孵育染色，完成染色后再将细胞酶解成单细胞，在悬浮状态上机分选，获得侧群细胞；其包括步骤：

1)进行人卵巢肿瘤细胞系细胞培养，

2)培养的细胞按一定密度接种于培养器皿中，使其贴壁生长，直接染色孵育90分钟，无需每15分钟振荡混匀，

3)孵育后用预冷HBSS液洗涤并酶解成单细胞悬液，离心弃去上清液后重悬浓缩细胞，在悬浮状态上机分选，获得侧群细胞。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)的人卵巢肿瘤细胞系是ES-2和OVCAR-3细胞系，

其中，培养ES-2细胞系使用含10％胎牛血清(Hyclone)的RPIM1640培养基(Hyclone)，OVCAR-3使用含20％胎牛血清(Hyclone)、0.01ng/μl胰岛素的RPIM1640(Hyclone)培养基，培养条件为37℃，5％CO₂，细胞每两天传代一次。

3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，采用的孵育液由如表1所述的成分组成，其PH值须调整到7.0；

表1

4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，卵巢肿瘤细胞系以5×10⁵/L的密度接种。

5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中直接Hoechst33342染色孵育90分钟。

6.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所获得的SP细胞在制备肿瘤干细胞的表面标志物中的用途。