[发明专利]一种采用两阶段pH控制发酵生产α-酮戊二酸的方法

权利要求书

1.一种采用两阶段pH控制发酵生产α-酮戊二酸的方法，其特征在于：以谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)GKG-047为生产菌株，采用两阶段pH控制，发酵前期以NH₃·H₂O调节pH在7.0～7.2，待菌株由生长型转变至产酸型后用NaOH调节，pH仍维持在7.0～7.2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于具体如下：以谷氨酸棒状杆菌为出发菌株，接种至活化斜面，32℃培养12～14h后，用接种环刮取斜面菌种接种至种子培养基，32℃，200rpm培养7～8h；按10%的接种量转接至装有发酵培养基的发酵罐中，34℃，溶氧维持在30以上，用NH₃·H₂O调节pH使其维持在7.0～7.2之间，开始发酵；待发酵液中的细胞形态开始转变，由生长型细胞转变为产酸型细胞时，将NH₃·H₂O替换成质量浓度为20%～25%的NaOH，pH依然维持在7.0～7.2之间。

3.根据权利要求书2所述的方法，其特征是：

⑴斜面培养基成分（g/L）计：蛋白胨10，酵母粉5，NaCl2.5，琼脂30，pH7.0～7.2；

⑵种子培养基成分：口服葡萄糖25g/L，玉米浆45mL/L，豆粕水解液30mL/L，K₂HPO₄·3H₂O2.2g/L，MgSO₄·7H₂O0.9g/L，NH₃NO₃6g/L，尿素3g/L；

⑶液体发酵培养基成分：口服葡萄糖80g/L，Na₂HPO₄·12H₂O3.85g/L，V_B10.4mg/L，MgSO₄·7H₂O2，MnSO₄5mg/L，FeSO₄5mg/L，ZnSO₄5mg/L，KCl1.333g/L，玉米浆3mL/L，糖蜜1.1g/L，豆粕水解液10mL/L。

4.根据权利要求书1、2或3所述的方法，其特征在于：长菌阶段菌种利用葡萄糖快速生长，形成菌体，不形成各种副产物有机酸，转型后的产酸阶段，菌体保持较高活性，利用葡萄糖合成α-酮戊二酸，几乎不形成其他有机酸。

5.根据权利要求书1、2或3所述的方法，其特征在于所述的谷氨酸棒状杆菌可用芽孢杆菌类细菌、肠杆菌科细菌或酵母类真菌替换。