[发明专利]用于制备牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种用于制备牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽，以及含有这些多肽的疫苗及它们的制备方法。

背景技术

口蹄疫（foot and mouth disease，简称FMD）是一种偶蹄动物发生的急性、高度接触性、发热性传染病，在世界范围内广泛分布。口蹄疫的传染性高，传播迅速，感染猪、牛、羊等牲畜后将导致幼畜死亡，成年动物生产能力急剧下降，因此严重危害畜牧业的发展和肉食及其畜产品的生产和供应。目前，口蹄疫使动物及动物产品的市场流通和国际贸易受到极大的封锁和限制，给流行国家和地区畜牧业生产造成巨大的经济损失。

口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）感染引起的。口蹄疫病毒属于细小核糖核酸病毒，具有多型性、易变性等特点。目前，已知全世界有7种血清型的口蹄疫病毒：A、O、C、Sat1（南非I型）、Sat2（南非II型）、Sat3（南非III型）和Asia I（亚洲I型）。这些主型中的每一种又分若干亚型，目前发现的亚型已有70多种。血清型A、O、C和Asia I型的口蹄疫病毒最为常见，其中血清型A病毒的变种最多，具有超过30种亚型。研究结果表明，口蹄疫病毒的衣壳蛋白是由四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4（Logan D等，1993年）组成的，每种各60个。VP1-VP3组成衣壳蛋白亚单位，位于衣壳蛋白的外侧，而VP4位于病毒颗粒的内部。VP1是主要的保护性抗原，现已发现O型口蹄疫有3个主要的抗原位点位于VP1上，其中133-160和200-213位构成了VP1上最重要且最容易变异的保护性抗原位点。

口蹄疫病毒各型之间的抗原性不同，彼此之间不能交互免疫。而且，在同一种血清型中抗原差异的程度也很大，以至于能够有效地抵抗一种亚型的口蹄疫疫苗可能针对同一血清型中的另一种亚型没有保护性。此外，口蹄疫毒株的抗原性还在不断发生变化，随着时间的推移，原有疫苗的效力减弱甚至消失，因此给口蹄疫的防治工作带来了很大的困难。

当前在我国牛群中流行的口蹄疫主要是O型、ASIA I型和A型口蹄疫。我国对口蹄疫实行强制性免疫，疫苗免疫是防治口蹄疫的主要手段。但是，我国现行使用的口蹄疫疫苗主要是病毒灭活疫苗，其存在着生物安全性差、副反应大、产品质量不稳定等问题。相比之下，目前世界上很多国家已经停止使用灭活疫苗，也禁止从使用灭活疫苗的国家进口畜产品。由此可见，在口蹄疫防治方面，我国已落后于世界发展形势。

在口蹄疫新型疫苗的研究方面，先后有基因工程亚单位疫苗、口蹄疫病毒载体疫苗、口蹄疫基因工程修饰疫苗的研究报道，但是其在免疫效果、生物安全性方面都存在着诸多问题，影响了这些新型疫苗的使用。此外，这些疫苗对于当前已经发生变异的流行毒株往往效果较差，不能有效地保护动物。因此，本领域仍然存在对于安全、有效的口蹄疫新型疫苗的需求。

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种用于制备牛口蹄疫O型合成肽疫苗的多肽，以及含有该多肽的疫苗。

本发明的另一个目的是提供一种上述多肽以及疫苗的制备方法。

本发明的又一个目的是提供上述多肽以及疫苗的用途。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一方面，本发明提供一种用于制备牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽，所述多肽包含如SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。此序列为口蹄疫O病毒的核心B细胞表位序列，负责产生针对口蹄疫病毒的中和抗体。

SEQ ID NO. 1：

YNGNCKYGENAVTNVRGDLQVLAQKAARCLPTSFNYGAIK

本发明中提及的“多肽”和“合成肽”为同一概念，均是指通过固相有机合成得到的肽物质。

优选地，所述多肽还包含具有增强免疫作用的口蹄疫内源或外源性T细胞表位氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4中的一个或多个。在本发明中，由计算机预测口蹄疫O病毒的T细胞表位，然后利用软件设计新的T细胞表位肽，再通过体外评价动物细胞免疫水平，由此筛选得到上述氨基酸序列的多肽，其能够辅助B细胞表位产生中和抗体。

SEQ ID NO. 2：

AGLAGVMVTESVAFRKKV

SEQ ID NO. 3：

VAQHNLSTEAIPLVVHESLMIVAQSIAGELKV

SEQ ID NO. 4：

SPGQVVYNRPHNSAYKV