[发明专利]鉴定用于癌症治疗的化合物的体外方法

说明书

发明领域

本发明涉及一种鉴定和评估用于癌症治疗，特别是用于肺癌、乳腺癌或结肠直肠癌的治疗的化合物功效的方法，目的是开发新型药物产品。本发明还涉及抑制胆碱激酶α蛋白表达和/或活性的试剂，和/或抑制此表达的作用。

发明背景

胆碱激酶(也已知为CK，CHK和ChoK)是kennedy或卵磷脂(PC)合成途径中的起始酶，其在镁离子(Mg⁺)存在下利用作为磷酸基团供体的5’三磷酸腺苷(ATP)将胆碱磷酸化为磷酸胆碱(PCho)。由多种致癌基因介导的这一转化诱导高水平的胆碱激酶活性，从而引起其产物PCho的细胞内水平异常升高，这些间接支持了胆碱激酶在形成人肿瘤的过程中的作用。然而，存在备选的不涉及激活胆碱激酶的PCho形成机制，并能够解释这种代谢物在肿瘤细胞中的高水平。

尽管有证据显示在肿瘤和转化了的细胞中出现了胆碱激酶活性的升高，但是由于并没有在其活力的升高和肿瘤的转化之间建立起明确的因果关系，因此它与致癌过程的关系没有得到充分的论证。另一方面，也没能鉴定出造成该结果的分子。

现已在人和其它哺乳类及啮齿类动物(大鼠、小鼠、牛、豚鼠、兔、猴)中鉴定了大约200个编码具有同源于胆碱激酶的初级结构的多肽的基因序列，且这些序列被命名为胆碱激酶αa，胆碱激酶αb，胆碱激酶α3，胆碱激酶β1，胆碱激酶β2，胆碱激酶CKB-1胆碱/乙醇胺激酶，胆碱激酶样乙醇胺激酶，Cots，Duff227，Cog3173CPT1B，SF1，SHOX2，FHOD2，FLJ12242，KRT5，FBL，ARL6IP4等。(参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi#219541)。实际上，从1982年以来，已有生化证据证明在从大鼠、小鼠和人中分离的不同组织中存在至少三种具有胆碱激酶活性和不同物化特征的同工酶。

最近在人基因组中鉴定了至少三个编码具有证实为胆碱激酶活性的蛋白质的基因，且将它们命名为ck-alpha，ck-beta，和HCEKV(美国专利US2003186241)，并且许多基因所编码的蛋白质30-65％的同源于ck基因编码的蛋白质，例如在(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi)中描述的基因CAI16602，CHKL，CAI16600，CAI16599，CAH56371，CAI16603，BAA91793，CAI16598，以及在(http://www.ebi.ac.uk/cgi-bin/sumtab？tool＝asdblast&jobid＝blast-20050412-18072127)中描述的基因CPT1B，EKI2，SF1，SHOX2，FHOD2，FLJ12242，KRT5，FBL，ARl61pS，TOMM40，MLL。不同胆碱激酶同工酶的一个非常相关的特征就是它们具有不同的生化特性，在它们和胆碱基质及ATP磷酸供体亲和力和甚至在它们的活性形式上(即能以二聚体或四聚体的形式出现)存在重要的改变。因此，确定在任意不同的已鉴定的胆碱激酶同工酶与由于它们在人肿瘤中过表达所引起的致癌能力之间是否存在着直接联系是十分必要的。

另一方面，已证明胆碱激酶的抑制作用在经致癌基因转化了的细胞内是一种新型有效的抗肿瘤方案，已将此方案在体内外推到裸鼠中。胆碱激酶活性在几个人乳腺癌瘤中的升高已于近期被发表，还看到胆碱激酶的变化是在一些人的肿瘤，如在肺部肿瘤、结肠直肠肿瘤及前列腺肿瘤中的频繁事件。