[发明专利]基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法

权利要求书

1.一种基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取牡蛎或扇贝冷冻干燥至水分质量含量0～10%，搅拌粉碎成粉末，以粉末加水制备浆液；或者取鲜牡蛎或扇贝直接加水，匀浆获得浆液；

所述浆液中固态物质量应占总质量的0.1%～5%；

S2、利用所述浆液获得牡蛎糖原或扇贝糖原；

S3、制备硫酸化试剂；

S4、利用所述硫酸化试剂对所述扇贝或牡蛎糖原进行硫酸化修饰。

2.根据权利要求1所述基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步骤S2包括如下工序：

S21、所述浆液中加入质量分数为0.1%～10%的胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、糜蛋白酶、链酶蛋白酶中的一种；调节pH值至所用酶的适宜环境，20～50℃酶解0.5～10小时；

S22、80～100℃灭酶5-30分钟；

S23、冷却后调pH值至中性，

S24、离心或者过滤去沉淀，留用上清液；

S25、所述上清液加入乙醇使乙醇终浓度达到体积比50%～90%进行醇沉沉淀；0.5～24小时后倾去上清液，收集沉淀，即为相应的扇贝糖原或牡蛎糖原。

3.根据权利要求2所述基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，其特征在于，步骤S21中适宜酶解的环境分别为：所述胃蛋白酶pH1～3、木瓜蛋白酶pH5～9、胰蛋白酶pH7～9、碱性蛋白酶pH8～11或、酸性蛋白酶pH1～3、糜蛋白酶pH8～9、链酶蛋白酶pH7～8。

4.根据权利要求1所述基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步骤S2包括如下工序：

所述浆液加热煮沸1-10小时，冷却后过滤或者离心，弃去沉淀；上清液加入乙醇使乙醇终浓度达到体积比50%～90%，弃去乙醇沉淀后的上清液，醇沉沉淀部分即为扇贝糖原或牡蛎糖原。

5.根据权利要求1-4任一所述基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，其特征在于，

所述步骤S3的具体工序为：按照溶剂体积与溶质质量比5～50ml:1g的比例将溶剂吡啶或者二甲基甲酰胺溶剂与溶质三氧化硫-吡啶互溶，制备所述硫酸化试剂；

或者，0～10℃下按照0.5～5:1比例将氯磺酸滴加到吡啶中，以0.5～2小时内均匀滴加完毕，制得所述硫酸化试剂。

6.根据权利要求5所述基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步骤S4包括如下工序：

S41、以吡啶或二甲基甲酰胺作为溶剂将所述扇贝糖原或牡蛎糖原配制成浓度10～500mg/ml的糖原溶液；

S42、所述硫酸化试剂加入所述糖原溶液，两种溶液的体积比例为1:5～5:1；

S43、在搅拌的情况下沸水浴反应0.5～2小时；

S44、以冰盐浴将反应液温度降低到0～10℃；

S45、用1-6M的NaOH或KOH调节到pH7～8；

S46、用3～10kDa孔径的半透膜或者工业陶瓷膜作为超滤工具，自来水超滤4～72小时，产物溶液为硫酸化糖原溶液；

或者选用透析方法，以分子大小为3kDa～10kDa孔径的透析袋扎紧，自来水透析4～72小时，袋内溶液为硫酸化糖原溶液。

7.根据权利要求6所述基于牡蛎、扇贝制备硫酸化糖原的方法，所述硫酸化糖原溶液经过冷冻干燥或喷雾干燥的方法得到硫酸化扇贝或硫酸化牡蛎糖原粉。