[发明专利]一种皮肤干细胞活性素的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种皮肤干细胞活性素的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤为：

a）收集儿童包皮等新鲜皮肤，低温保存下运回制备车间，用4℃－6℃的生理盐水清洗三次。剪成皮粒，加入10－30倍的人工体液中，用组织打碎机打碎成皮浆；

b）向皮浆加入适量胶原酶消化4～48小时，低温离心，弃去上清液。沉积底层的细胞团，用人工体液洗涤三次，每次离心，弃去上清液，用无血清培养基培养洗净的混合细胞24小时；

c）将混合细胞染色，用荧光细胞分离器分离出干细胞，主要是皮肤干细胞；

d）将皮肤干细胞用无血清培养基进行传代扩增，扩增至适当倍数后，连培养基一同移入细胞破碎机中将干细胞破碎；

e）用核酸酶和基因酶将干细胞破碎后释出的DNA和RNA分解为戊糖、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、磷酸及其盐等基础物质；

f）低温离心，收集上清液，底部沉积物用人工体液洗涤一次，离心，收集上清液，将两上清液合并，将合并的上清液以一定流速通过分子筛吸附柱，以除去残存的蛋白质及其他生物分子，再用人工体液将吸附在柱上的中、低分子洗脱出来；

g）在透析机上用超纯水透析去除洗脱液中的电解质离子，冷冻干燥得本发明产品的冻干粉。

2.如权利要求1所述一种皮肤干细胞活性素的制备方法，其特征在于，所述皮肤干细胞将扩增至适当倍数，是指扩增15－25代，即扩增到2¹⁵－2²⁵倍，亦即32768～33554432倍。

3.如权利要求1和2任意一项权利要求所述的一种皮肤干细胞活性素的制备方法制备出来的冻干粉的应用，其特征在于，所述的冻干粉，用人工体液又称生理平衡液溶解后施用，人工体液的用量为50－500ug干粉兑1ml人工体液，施用方式可直接涂擦于要保健的皮肤，也可用溶液湿润，溶解干粉的人工体液，可用保湿增稠剂增稠，保湿增稠剂为PH调至7±0.4的透明质酸，干态薄膜或面膜后覆盖于皮肤或面部。