[发明专利]一种皮肤干细胞活性素的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种干细胞活性素的制作方法。

背景技术

近年来随着干细胞技术的发展，干细胞用于治疗疾病，用于美容等的应用研究已引起业界的高度关注。由于干细胞在体外培养和扩增中有自我促进（自我催化）的表现，许多研究者认为干细胞在培养过程中会分泌一些活性物质，包括生长因子、细胞因子、活性多肽、蛋白质、生长激素、微量元素等物质，促进自身的扩增及分化的子细胞的增殖。已有人从干细胞培养的残液中提干细胞分泌因子（又称干细胞分泌素），用于化妆品、保健品。对化妆品而言，主要功能是促进损伤、老化皮肤的修复；阻止皮肤细胞过快衰老，但他们的干细胞来源主要是从血液、骨髓、牙肉等组织中提取成体干细胞，也有从胚胎组织中提取成体干细胞的。多数所得的是多种干细胞的混合物，包含骨髓间充质干细胞，造血干细胞、肝脏干细胞、肌肉干细胞，虽也有表皮干细胞，但数量不多，基本没有真皮干细胞。因为表皮干细胞及真皮干细胞（合称皮肤干细胞）主要存在（潜伏）于皮肤中。这些干细胞分泌素对上述多种干细胞及其分化的子细胞起促进作用，但对皮肤干细胞及皮肤细胞起促进作用的成分并不多。用于皮肤修复和保健的干细胞应以从人皮肤提取的皮肤干细胞活性成份最有针对性，最为集中和有效。

发明内容

为解决上述现有干细胞分泌素对皮肤细胞起促进作用的成份不多，本发明的目的是提供一种皮肤干细胞活性素的制备方法，该制备方法出来的皮肤干细胞活性素对皮肤修复和保健效果较好。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种皮肤干细胞活性素的制备方法，该制备方法的步骤为：

a)收集儿童包皮等新鲜皮肤，低温保存下运回制备车间，用4℃－6℃的生理盐水清洗三次。剪成皮粒，加入10－30倍的人工体液中，用组织打碎机打碎成皮浆；

b)向皮浆加入适量胶原酶消化4～48小时，低温离心，弃去上清液。沉积底层的细胞团，用人工体液洗涤三次，每次离心，弃去上清液，用无血清培养基培养洗净的混合细胞24小时；

c)将混合细胞染色，用荧光细胞分离器分离出干细胞，主要是皮肤干细胞；

d)将皮肤干细胞用无血清培养基进行传代扩增，扩增至适当倍数后，连培养基一同移入细胞破碎机中将干细胞破碎；

e)用核酸酶和基因酶将干细胞破碎后释出的DNA和RNA分解为戊糖、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、磷酸及其盐等基础物质；

f)低温离心，收集上清液，底部沉积物用人工体液洗涤一次，离心，收集上清液，将两上清液合并，将合并的上清液以一定流速通过分子筛吸附柱，以除去残存的蛋白质及其他生物分子，再用人工体液将吸附在柱上的中、低分子洗脱出来；

g)在透析机上用超纯水透析去除洗脱液中的电解质离子，冷冻干燥得本发明产品的冻干粉。

一种优选方案，所述皮肤干细胞将扩增至适当倍数，是指扩增15－25代，即扩增到2¹⁵－2²⁵倍，亦即32768～33554432倍。

一种皮肤干细胞活性素的制备方法制备出来的冻干粉的应用，所述的冻干粉，用人工体液又称生理平衡液溶解后施用，人工体液的用量为50－500ug干粉兑1ml人工体液，施用方式可直接涂擦于要保健的皮肤，也可用溶液湿润，溶解干粉的人工体液，可用保湿增稠剂增稠，保湿增稠剂为PH调至7±0.4的透明质酸，干态薄膜或面膜后覆盖于皮肤或面部。

相对于现有技术，本发明具有如下优点及有益效果：