[发明专利]凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法

权利要求书

1.一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，包括：

(a)斜面菌体活化

将凝结芽孢杆菌（ACCC10229）接种至一级斜面培养基上，30℃～45℃培养20～32h；

（b）凝结芽孢杆菌的种子罐培养

将步骤（a）中的活化后的结芽孢杆菌单菌落接种于二级培养液中，装液量为50～100mL/500mL，30℃～45℃、160～300rpm/min条件下培养20～32h；然后将培养后的种子液体积百分比0.5～10%，在培养基上30℃～45℃、160～300rpm/min条件下培养20～36h；

（c）凝结芽孢杆菌的固体发酵

将步骤（b）中的培养基按1%～10%的重量比接入固体发酵培养基中，培养基含水量控制在49%～58%，pH范围在6.0～7.0，曲房相对湿度保持在85%以上，料温控制在30℃～45℃，采用半封闭式发酵48～72h；

或者（b’）将步骤（a）中的活化后的结芽孢杆菌单菌落接种于二级茄型培养瓶中，30℃～45℃培养36～48h；

（c’）按10～15瓶二级茄型培养瓶培养基接入1.0t固体发酵培养基中，培养基含水量控制在49%～58%，pH范围在6.0～7.0，曲房相对湿度保持在85%以上，料温控制在30℃～45℃，采用半封闭式发酵48～72h。

2.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中的一级斜面培养基为按下述比例配制的混合液（g/L）：酵母膏5～15g/L，蛋白胨5～15g/L，葡萄糖0.5～5g/L，氯化钠5～10g/L，磷酸氢二钾1～5g/L，硫酸锰0.1～2g/L，pH7.0～7.2。

3.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中的一级斜面培养基为按下述比例配制的混合液（g/L）：酵母膏5～15g/L蛋白胨5～15g/L葡萄糖0.5～5g/L氯化钠5～10g/L磷酸氢二钾1～5g/L硫酸锰0.1～2g/L，琼脂15～20g/L，pH7.0～7.2。

4.根据权利要求2所述的一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中的二级液体培养基为按下述比例配制的混合液（g/L）：葡萄糖5～20g/L氯化钠1～5g/L酵母膏3～12g/L胰蛋白胨10～25g/L牛肉膏5～10g/L磷酸二氢钾1～5g/L硫酸镁1～5g/L硫酸锰0.1～2g/L碳酸钙1～5g/LpH6.6～7.0。

5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（c）或（c’）中的固体发酵培养基为按下述比例配制：麸皮30%～40%，玉米粉1%～5%，豆粕粉30%～40%，葡萄糖0.1%～2%，氯化钠2%～5%，磷酸氢二钾0.2%～1%，硫酸锰0.1%～0.5%，碳酸钙0.5%～2%，氯化铵0.5%～1%，pH7.0～7.2。

6.根据权利要求1-4任一权利要求所述的一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（c）或（c’）中的固体发酵培养基为按下述比例配制：麸皮55%～70%，豆粕20%～40%，玉米粉1%～5%，蔗糖0.1%～1%，乳糖0.5%～1.5%，葡萄糖0.1%～1%，酵母膏0.1%～1%，pH7.0～7.2。

7.根据权利要求1-4任一权利要求所述的一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（c）或（c’）中的固体发酵培养基为按下述比例配制：麸皮40%～50%，玉米粉5%～10%，豆粕粉40%～50%，葡萄糖0.5%～1%，氯化钠2%～5%，磷酸氢二钾0.5%～2%，硫酸锰0.5%～1%，pH7.0～7.2。