[发明专利]一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法

说明书

本申请是申请日为2010年08月09日，申请号为201010247885.7，发明创造名称为“一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法，属于药理活性物质的体内递送及其临床应用领域。具体来说，本发明是一种利用蛋白及多肽展开与再折叠或自组装的方法将药理活性物质包入蛋白，形成纳米粒的方法。  

背景技术

静脉注射给药能够快速直接地作用于机体。为了降低静脉注射给药的副作用，有效的方法之一就是将药理活性物质包入微米或纳米级的粒子中。一方面，静脉注射的粒子可以缓释药理活性物质并延长药理活性物质的半衰期；另一方面，靶向材料可以将粒子中的药理活性物质靶向地释放。

在现有技术涉及的蛋白粒子的制备方法中，如Abraxane?的制备方法（美国专利No.6,749,868，美国专利No.5,560,933），将蛋白溶液与有机溶剂均匀混合形成乳化液，高压匀浆，形成以紫杉醇为核心的白蛋白纳米粒。除了这种制备方法比较复杂之外，还需要用高压及相应的高温来去除有机溶剂，从而获得纳米粒。二氯甲烷，乙腈等有机溶剂具有毒性，需要控制其残留量。此外，这些方法包载药理活性物质的能力是有限的。同时，由于制备过程中的高压和剪切力，蛋白和多肽还可能失去生物活性。

蛋白粒子还被众多文献报道作为药理活性物质和诊断试剂的载体。其中，白蛋白微球可以用热交联和化学交联的方法来制备。热交联微球是在100～150℃下从乳化混合物（如白蛋白、需包载的药理活性物质和适当的油相）中制备。然后微球用适当的溶剂洗涤并保存。Leucuta等报道了热交联微球的制备方法[International Journal of Pharmaceutics Vol. 41:213-217(1988)]；化学交联微球的制备，如文献[Science Vol. 213:233-235(1981)]所报道，用戊二醛交联蛋白，然后洗涤并保存。

而且，现有技术中蛋白纳米粒的制备方法很难保持蛋白的生物活性。而且，难溶于水的药理活性物质也很难被包入蛋白纳米粒中，因为这种方法本身依靠乳化液的水相交联。水溶性药理活性物质因其溶于含蛋白的水相而能够被交联进入蛋白阵列，而水溶性差或脂溶性药理活性物质难以进入这种方法所形成的蛋白阵列中。

发明内容

本发明的技术目的在于提供一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法，以解决某些药理活性物质由于其疏水的性质而导致无法体内递送，以及形成纳米粒之后的蛋白质活性丧失的问题。

为了实现本发明的技术目的，本发明的技术方案为：

一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法，包括以下步骤：(a)用第一种溶剂溶解蛋白获得蛋白溶液；(b)在变性剂或者适合的变性条件中将药理活性物质加入步骤(a)中所述的蛋白溶液中，使蛋白展开与再折叠或自组装，把药理活性物质包入蛋白，形成蛋白纳米粒。

本发明技术方案中所述的蛋白纳米粒平均粒径为5～2000 nm，优化的为25～500 nm，最优的为50～300 nm。

本发明技术方案中所述的蛋白纳米粒可包载占蛋白纳米粒总重量1%～40%的药理活性物质。

本发明技术方案所述的药理活性物质是疏水性药理活性物质，如抗肿瘤药物，心血管药物，抗炎药物，降糖药物，中枢神经系统药物，免疫抑制药物，以及抗病毒药物。

其中，所述的疏水性药理活性物质是紫杉醇、多西紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡莫司汀、阿霉素、苯芥胆甾醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黄酸、冬凌草甲素、鬼臼毒素、阿托伐他汀、斯伐他汀、非诺贝特、硝苯地平、布洛芬、吲哚美辛、吡罗昔康、格列本脲、地西泮、利哌利酮、齐拉西酮、他克莫司、雷帕霉素、茚地那韦、利托那韦、Telaprevir（CAS号402957-28-2）、洛匹那韦、或它们的组合。

其中，优选的疏水性药理活性物质是紫杉醇或多西紫杉醇。

本发明技术方案所述的药理活性物质是亲水性药理活性物质。

其中，所述的亲水性药理活性物质是环磷酰胺、博莱霉素、道诺霉素、表柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶或其类似物、铂或其类似物、长春碱或其类似物、高三尖杉酯碱或其衍生物、放线菌素-D、丝裂霉素-C、依托泊苷、或它们的组合。