[发明专利]一种合成替度鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成替度鲁肽的方法。

背景技术

替度鲁肽，英文名为Teduglutide，一种胰高血糖素样肽2（GLP-2）类似物，一种天然生成的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。该药增加了这些细胞的数量，后者可增加小肠吸收、减少腹泻。欧洲商品名为Revestive，在美国商品名为Gattex。在临床上用于治疗成人短肠综合征。该药成为首个被推荐应用于这种罕见却使患者极其虚弱疾病的药物，结构式和肽序如下：

在替度鲁肽的现有合成方法中，主要是采用纯固相顺序偶联的方法，如专利CN10182087A，其以wang树脂为载体，采用常规顺序偶联，最终切割得到替度鲁肽。但是该专利在合成N末端的His时，采用Fmoc固相常规的偶联原料如Fmoc-His(Trt)-OH及常用偶联方法，造成His的消旋杂质，并且杂质通过纯化方法难以去除，导致替度鲁肽产品纯度的降低而杂质D-His-替度鲁肽含量较高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成替度鲁肽的方法，使得本发明所述方法能够提高其纯度，降低杂质D-His-替度鲁肽含量。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种合成替度鲁肽的方法，包括以下步骤：

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、Asp侧链上、Ser侧链上、Glu侧链上、Asn侧链上、Thr侧链上、Arg侧链上、Gln侧链上、Trp侧链上和Lys侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽片段树脂；

步骤2、所述多肽片段树脂脱N端保护基，与N端偶联有X保护基且侧链上偶联有Y保护基的His或N端偶联有X保护基且侧链上偶联有Y保护基的His盐在双试剂偶联体系和有机碱的作用下进行偶联反应，得到替度鲁肽树脂；

其中，所述X保护基为Boc保护基或Trt保护基，所述Y保护基为Trt保护基、Bum保护基、Boc保护基、mtt保护基或者mmt保护基；所述双试剂偶联体系由A试剂和B试剂组成，A试剂选自HBTU、HATU、PyBOP、PyAOP中的一种，B试剂选自HOAt、HOBt中的一种，所述有机碱为DIPEA或TMP；

步骤3、将替度鲁肽树脂脱除N端X保护基后裂解，获得替度鲁肽粗品，经RP-HPLC纯化后获得替度鲁肽纯品。

其中，作为优选所述树脂为CTC树脂或者Wang树脂。在步骤1的合成中，除本发明所限定的保护基外，也可以采用其他合适的保护基对氨基酸加以保护。

作为优选，步骤2中所述A试剂为HATU，所述B试剂为HOAt，所述有机碱为TMP。

在本发明所述方法中，首先按照替度鲁肽肽序合成2-33片段，然后再将2-33多肽片段与由特定保护基保护的His合成原料在特定的偶联体系下偶联获得替度鲁肽，解决了现有合成方法中由于合成原料以及偶联方法的不当造成His的消旋杂质，最终导致替度鲁肽纯度降低杂质和D-His-替度鲁肽含量较高的问题。以替度鲁肽主链N端到C端的氨基酸顺序编号，如下式：

H-His¹-Gly²-Asp³-Gly⁴-Ser⁵-Phe⁶-Ser⁷-Asp⁸-Glu⁹-Met¹⁰-Asn¹¹-Thr¹²-Ile¹³-Leu¹⁴-Asp¹⁵-Asn¹⁶-Leu¹⁷-Ala¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Asp²¹-Phe²²-Ile²³-Asn²⁴-Trp²⁵-Leu²⁶-Ile²⁷-Gln²⁸-Thr²⁹-Lys³⁰-Ile³¹-Thr³²-Asp³³-OH