[发明专利]一种制备多能性干细胞的方法有效
| 申请号： | 201310102292.5 | 申请日： | 2013-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN104073514B | 公开（公告）日： | 2017-04-05 |
| 发明（设计）人： | 胡晓湘;隋丹丹;李宁 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人： | 王朋飞,张庆敏 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 多能 干细胞 方法 | ||
1.一种TMP调控系统表达载体，其特征在于，以piggyBac转座子载体为骨架载体，所述表达载体包括从ZGs载体上获得的PB5′端和PB3′端，采用单顺反子读码框架，以启动子EF1α启动转录，三个外源基因OCT4、KLF4和SOX2之间由2A序列连接，DD基因位于上述至少一个外源基因的5′端，转座酶载体PBase中含有CAG启动子；
其中，所述DD基因为带有R12Y和Y100I突变的大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因，并根据人的密码子偏好性进行了优化。
2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述ZGs载体的核苷酸序列如Seq ID No.6所示。
3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。
4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.2所示。
5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.3所示。
6.一种制备多能性干细胞的方法，其特征在于，将权利要求1-5任一项所述的表达载体导入胚胎成纤维细胞中，所得阳性细胞克隆经磺胺类药物TMP处理后接种饲养层细胞，通过培养传代，获得多能性干细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述胚胎成纤维细胞为小鼠胚胎成纤维细胞。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，细胞培养基中磺胺类药物TMP的浓度为1μM。
9.根据权利要求6-8任一项所述方法制备的多能性干细胞。
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