[发明专利]一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法

权利要求书

1.一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）向酒糟中加入2～5倍重量的水，在室温搅拌条件下浸泡15～30min，过20目筛，向滤液中加入滤液重量0.01～0.1%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活为50000U/ml，在40～55℃下水解2～4h，然后调节pH至4.0～5.0，加入滤液重量0.1～0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活为100000U/ml，在60～65℃下水解4～6h，制得水解液，然后将水解液浓缩至原体积的20%～50%，制得酒糟提取液；

（2）取活菌浓度为1.0～1.5×10⁹CFU/ml的布拉德酵母菌（Saccharomyces boulardii）发酵液50～60份，活菌浓度为3.0～3.5×10⁹CFU/ml的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）发酵液20～30份，活菌浓度为1.0～1.2×10⁹CFU/ml的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）发酵液20～30份，混合后，制得混合液，混合液经分离菌体，制得混合湿菌体；

（3）配制海藻糖质量浓度为5～8%、维生素C质量浓度为0.05～1%、乳糖质量浓度为1～5%的保护液；

将玉米淀粉和沸石粉按质量比（1～2）:（1～2）的比例混合均匀，制得复合载体；

（4）将步骤（2）制得的混合湿菌体与步骤（3）制得的保护液按质量比（1～2）:（1～2）的比例混合均匀，然后分别按步骤（2）制得的混合液重量的40～60%各加入步骤（1）制得的酒糟提取液和步骤（3）制得的复合载体，混合均匀后经40～50℃干燥，制得微生物饲料益生菌剂。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的酒糟中，总糖8～10wt%，还原糖0.2～0.5wt%，总氮1～1.5wt%，纤维素10～15wt%，含水量60～65wt%，酸度2～2.5wt%，余量为粗脂肪和无机盐及杂质。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的布拉德酵母菌（Saccharomyces boulardii）为保藏号ATCC MYA796的布拉德酵母菌（Saccharomyces boulardii）Sb48或保藏号CICC31992的博拉迪酵母菌（Saccharomyces boulardii）；

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）为保藏号CICC22696的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）；

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为保藏号为CFCC2698的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）或保藏号为CFCC2741的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的分离为经15000rpm连续离心分离或加入絮凝剂沉淀过夜分离。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中布拉德酵母菌（Saccharomyces boulardii）发酵液按如下方法制备：

a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌种接入种子培养基中，在温度30℃、摇瓶转速180rpm的条件下，摇瓶培养24～30小时，制得种子液；

b、按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度30℃、转速200rpm的条件下，培养24～30小时，制得二级种子液；

c、按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度30℃、转速200rpm的条件下，培养30～36小时，制得活菌浓度为1.0～1.5×10⁹CFU/ml的布拉德酵母菌（Saccharomyces boulardii）发酵液。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤a中，种子培养基每升含有如下组分：葡萄糖40g，蛋白胨1g，水定容至1L，pH5.5，121℃灭菌20分钟；

所述步骤b和c中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比：1～2%的葡萄糖或废糖蜜，0.5～1%的硫酸铵，0.5～1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为5.5，121℃灭菌20分钟。