[发明专利]基于电导率检测的等电聚焦电泳测试结果预评估的方法

权利要求书

1.一种基于电导率检测的等电聚焦电泳测试结果预评估的方法，其特征在于，通过采用固化pH梯度胶条或非固化pH梯度胶条对经过前处理的蛋白质样品进行等电聚焦处理，根据处理期间的电迁移阶段以及扩散阶段的电流计算得到电迁移阶段以及扩散阶段的电导与时间的关系，进而通过电导率变化衡量蛋白质样品前处理脱盐效果及操作正确与否。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的前处理的蛋白质样品是指：利用透析脱盐、凝胶过滤脱盐或超滤脱盐及其对应不同脱盐程度处理的样品，之后冷冻干燥备用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的固化pH梯度胶条或非固化pH梯度胶条是指：采用被动水化方式，选择胶条长度为7cm，胶条pH为3-10，水化12h；上样量为100μg/条，上样体积为125μL/条；环境温度：25度；测试控温：18度。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的等电聚焦处理是指：将固化pH梯度胶条或非固化pH梯度胶条浸渍于经过样本前处理的蛋白质样品后，两端与可控电压源的正负极相连组成回路，通过调整电压源的输出得到胶条两端的电压，通过串联电流计检测该过程中回路中的电流。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的调整电压源的输出是指：

当采用固化pH梯度胶条时，按以下步骤调整电压：

1：电压：4000V，升压方式：快速升压，时间：15000Volt Hr；

2：电压：500V，恒压，电压调节方式：快速；

当采用非固化pH梯度胶条时，按以下步骤调整电压：

i：电压：500V，升压方式：线性升压，时间：5h；

ii：电压：2000V，电压调节方式：快速，时间：5min；

iii：电压：200V，恒压，电压调节方式：快速。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的电迁移阶段以及扩散阶段的电导与时间的关系是指：

当采用固化pH梯度胶条时：或者是：

当采用非固化pH梯度胶条时：κexp,non-IPG=Lexp,non-IPGVexp,non-IPGf(t)]]>

其中：f(t)＝I_exp，即通过电流计测得的回路中电流随时间的变化；V_exp,non-IPG以及V_exp,IPG为等电聚焦过程中胶条两端的电压；L_exp,non-IPG以及L_exp,IPG为胶条长度。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的通过电导率变化衡量蛋白质样品前处理脱盐效果及操作正确与否是指：

当采用固化pH梯度胶条时：标准条件下，蛋白质样品IPG-IEF对应的起始电导变化从0.008μS/cm到0.02μS/cm之间；当蛋白样品IPG-IEF起始电导超过0.02μS/cm，说明此样品中含有较高浓度的盐类，此时IEF的聚焦效果一般较差，成功率低；当蛋白样品IPG-IEF起始电导低于0.008μS/cm，则说明此测试胶条水化不完全，或/和电极接触不良，或/和上样成分漏加或误加等偶然原因，此时IEF成功率很低，应及时纠正或终止测试；

当采用非固化pH梯度胶条时：标准条件下，蛋白质样品non-IPG-IEF对应的起始电导变化从0.04μS/cm到0.2μS/cm之间；当蛋白样品non-IPG-IEF起始电导超过0.2μS/cm，说明此样品中含有较高浓度的盐类，此时IEF的聚焦效果一般较差，成功率低；当蛋白样品non-IPG-IEF起始电导低于0.04μS/cm，则说明此测试胶条水化不完全，或/和电极接触不良，或/和上样成分漏加或误加等偶然原因，此时IEF成功率很低，应及时纠正或终止测试。