[发明专利]基于电导率检测的等电聚焦电泳测试结果预评估的方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物分离与分析技术领域的方法，具体是一种基于电导率检测的等电聚焦电泳（isoelectric focusing，IEF）测试结果预评估的新方法，该方法具有识别电迁移电流与扩散电流、识别固化pH梯度胶条（IPG strip）与非固化pH梯度胶条（non-IPG strip）、识别蛋白样本前处理效果好坏、以及识别实验操作方法正确与错误功能的检测方法。

背景技术

等电聚焦电泳（IEF）是利用电解质在介质中创造一个pH梯度，同时利用蛋白质具有两性解离和等电点的特点，对蛋白质进行高效分离富集（P.G.Rightti,In:T.S.Work and R.H.Rurdon,Laboraotary Techniques in Biochemistry and Molecular Bioboligy,Elsevier Biomedical Press,Amesterdam New York Oxford,v II,1983,p.1-86,268-313）。IEF电泳技术应用广泛，它不仅是蛋白质pI表征和纯度鉴定的标准分析技术；同时也是复杂蛋白质及其组学研究中的关键分离方法（Nilesh S Tannu,Scott E Hemby,Nature Protocols,1(2006)1732），在双向凝胶电泳中亦是作为关键的第一向分离技术（P.H.O′Farrell,J.Biol.Chem.250(1975)4007；Rolland AD,Evrard B,Guitton N,J.Proteome Res.6(2007)683）。

基于常规凝胶电泳的IEF技术主要有二种，包括：（i）、管式凝胶IEF技术（L.E.M.Miles,G.E.Simmons,A.Chrambach,Anal.Biochem.49(1972)109.）；（ii）、薄层凝胶IEF技术（P.G.Rightti,In:T.S.Work and R.H.Rurdon,Laboraotary Techniques in Biochemistry and Molecular Bioboligy,Elsevier Biomedical Press,Amesterdam New York Oxford,v II,1983,p.1-86,268-313）。但在这两种凝胶IEF电泳技术中始终存在pH梯度水平化（plateau of pH gradient,P.Arosio,E.Grana and P.G.Righetti,J.Chromatogr.,166(1978)55）和pH梯度漂移（drifting of pH gradient,H.Rilbe,In:Electrofocusing and Isotachophoresis(Editors:B.J.Radola and D.Graeslin),Walter de Gruyter & Co.,Berlin New York,1977,p35-50），这二种现象造成的IEF不稳定性。并且在双向凝胶电泳（two dimensional gel electrophoresis，2DE）中，由于管式和薄层凝胶IEF的凝胶很难取出，取出后也很难完整的进行后续的转移操作；因此，基于常规凝胶的第一向IEF分离技术很难与第二向的SDS-PAGE电泳兼容。