[发明专利]一种HPV-E6蛋白的检测方法

权利要求书

1.一种HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）配制HPV-E6蛋白反应剂：取5-200mmol/L缓冲液，以其作为基数，加入其重量0.1%-5%防腐剂、0.1%-1%稳定剂、0.1%-40%电解质氯化钠和20%-40%高分子加速剂混合；

（2）配制抗HPV-E6蛋白抗体试剂：取抗HPV-E6蛋白抗体，以其为基数，加入其重量0.001%-5%的抗氧化剂和20%-40%的稳定剂混合；

（3）将HPV-E6蛋白反应剂与抗HPV-E6蛋白抗体试剂按体积比3～100:1混合；

（4）配制一提血清型恒定值校准液：取浓度为20～100mmol/L的缓冲液50～100ml，加入其体积1～5%的防腐剂，5～20%的稳定剂，防腐剂浓度为0.01～10mmol/L，稳定剂浓度为0.1～40mmol/L；

（5）在340nm波长下测定步骤（3）所得混合液的吸光值，与步骤（4）的恒定标准液比较，计算出样本中HPV-E6蛋白含量。

2.根据权利要求1所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中另加入缓冲液重量基数0.1%-10%表面活性剂和2%～8%反应促进剂；其中表面活性剂为非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂，反应促进剂为溴化己二甲胺，浓度为0.01-19mmol/L。

3.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液，PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液。

4.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）和（4）中的防腐剂为叠氮钠、对羟基苯甲酸、苯酚或广谱杀菌剂。

5.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）和（2）中的稳定剂为氯化镁、乙二醇或海藻糖。

6.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的高分子加速剂为聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000。

7.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中的抗氧化剂为丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯、二丁羟基甲醛或苯多酚。

8.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中的抗HPV-E6蛋白抗体为羊抗人HPV-E6蛋白抗血清、马抗人HPV-E6蛋白抗血清、鼠抗人HPV-E6蛋白抗血清或兔抗人HPV-E6蛋白抗血清。

9.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（4）中的缓冲液为PBS、Tris、TAPS、HEPPS、CHES、CAPS、CAPSO、POPSO、Trice、甘氨酸、双甘氨酸、二甘氨酸或硼酸盐。

10.根据权利要求1或2所述的HPV-E6蛋白的检测方法，其特征在于，所述步骤（4）中的稳定剂的实例可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、丙三醇、单糖、多糖中的一种或多种混合。