[发明专利]抗癌用4’-去甲峨参内酯及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种对宫颈癌细胞Hela以及小鼠黑色素瘤细胞B16有显著抑制作用的4’-去甲峨参内酯及其制备方法。 

背景技术

癌症亦称“恶性肿瘤”，中医学归属于症瘕、积聚、噎膈、反胃、瘿瘤等病证范畴。现代医学认为：癌症是由于机体在环境污染、化学污染（化学毒素）、电力辐射、自由基毒素、微生物（细菌、真菌、病毒）其代谢毒素、遗传特性、内分泌失调、免疫功能紊乱等各种致癌物质、致癌因素的作用下，导致身体正常细胞发生癌变的结果。临床表现为组织细胞异常增生而形成的局部肿块。其特点是癌细胞无限制、无止境地增生，大量消耗患者体内营养物质，并释放多种毒素，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损，最终由于脏器功能衰竭而死亡。其常规治疗方法包括外科治疗、放射治疗、化学治疗、中医药治疗、中西医结合治疗、靶向治疗等。目前对于癌症病人常用的手段为化学治疗，但由于其副作用大以及耐药性的存在，化疗药物很快就失去了作用。因此寻求毒副作用小、抑瘤率高的药物研发越来越引起重视。 

峨参nthriscμs sylvestris（L.）Hoffm.，伞形科峨参属植物，为川产道地药材，中医认为峨参有补中益气，祛瘀消肿，补肺平喘的作用。药理作用研究提示峨参具有增强机体免疫、抗癌、抗病毒、抗炎、抗过敏以及健脾益气、活血化瘀等作用。本专利申请发明人所在课题组在前期文献考察以及从峨参提取部位活性筛选的结果发现，峨参内酯（去氧鬼臼毒素）具有抑制多种癌细胞增殖的作用，但是毒性较大，开发有一定的局限性。本发明主要通过化学合成途径得到4’-去甲峨参内酯，研究其抗癌活性，目前尚无文献报道。 

发明内容

本发明提供一种抗癌用4’-去甲峨参内酯及其制备方法，研究发现所述4’-去甲峨参内酯对宫颈癌细胞Hela以及小鼠黑色素瘤细胞B16具有明显的抑制和诱导凋亡作用，其制备方法简单、易控、成本低廉、收率高。 

本发明技术方案如下： 

抗癌用4’-去甲峨参内酯，其分子式为C21H20O7，化学名为“5R-5,8,8a,9-四氢-5-（4- 羟基-3,5-二甲氧苯基）呋喃（3’,4’:6,7）萘并-[2,3-d]-1,3-间二氧杂环烯-6(5aH)-酮”，结构式为： 

抗癌用4’-去甲峨参内酯的制备方法，其特征是以鬼臼毒素为原料，首先在高压釜中将鬼臼毒素原料溶于乙酸，然后加入钯碳催化剂，在1.1～2个大气压的氢气压力和90～100℃的温度条件下使鬼臼毒素与氢气反应制得峨参内酯，最后将峨参内酯与溴化氢在乙酸溶液中反应脱去甲基得到4’-去甲峨参内酯。 

在峨参内酯的制备过程中，所述钯碳催化剂质量用量为鬼臼毒素原料质量的5%～10%之间，就可得到收率75%左右的峨参内酯，大于10%的催化剂用量对峨参内酯生产量无影响；氢气压力应大于1.1个大气压，氢气压力的继续提高对反应时间和反应生成的峨参内酯无影响；反应时间超过5小时之后，反应即终止，此时再延长反应时间对峨参内酯的收率和纯度均无影响。峨参内酯在去甲基处理前的峨参内酯粗品，可采用乙酸乙酯:石油醚=1:3的混合溶剂进行重结晶提纯，重结晶提纯后可得到液相纯度大于98%的白色粉末峨参内酯。 

在峨参内酯去甲基制备4’-去甲峨参内酯过程中，可以采用溴化氢或者碘化钠和甲磺酸来制备，碘化钠和甲磺酸制备4’-去甲峨参内酯收率较低，优先选用溴化氢制备（峨参内酯与溴化氢的摩尔比为1:3～1:5），反应溶剂可以是二氯甲烷、氯仿或乙酸，优先选用乙酸做反应溶剂（溶剂质量为峨参内酯质量的5～10倍）；去甲基后的4’-去甲峨参内酯粗品，可采用甲醇进行重结晶提纯，重结晶提纯后可得到液相纯度大于98%的4’-去甲峨参内酯。 

本发明筛选优化了4’-去甲峨参内酯的合成路线和工艺，高收率的制备得到了4’-去甲峨参内酯。 

本发明应用MTT比色法检测到4’-去甲峨参内酯对宫颈癌细胞Hela、小鼠黑色素瘤细胞B16有显著的抑制作用，且抑制率与浓度呈明显的效应关系，随着药物浓度的增加，细胞存活率不断下降。用倒置显微镜观察到，两种肿瘤细胞生长明显受到抑制，细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，细胞由梭形变成圆形细胞脱落，浮悬于培养液中。不同浓度的4’-去甲峨参内酯作用于Hela和B16细胞，48h后用DAPI染色，荧光下可见细胞核发生明显皱缩和断裂。