[发明专利]脱硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法有效
| 申请号： | 201310107467.1 | 申请日： | 2013-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN103157452A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 魏峥;邹强;林江慧;魏可镁 | 申请（专利权）人： | 福州大学 |
| 主分类号： | B01J20/281 | 分类号： | B01J20/281;B01J20/30;B01D15/38;C07K1/22 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350108 福建省福州市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脱硫 酸化 肝素 衍生物 亲和 色谱 材料 制备 方法 | ||
1.一种脱-2-O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
（1）琼脂糖凝胶颗粒的活化：取洗净抽干后的凝胶颗粒，按每1g凝胶溶于1-3ml的0.6M NaOH中，并且加入0.1-0.2ml 环氧氯丙烷，在40℃水浴摇床中反应2小时，再充分水洗，抽干，加入2倍体积的浓氨水，于40℃水浴、120rpm/min摇床中摇动2小时，充分水洗抽干备用，得活化的琼脂糖凝胶颗粒A；
（2）活化的琼脂糖凝胶颗粒和脱-2-O硫酸化肝素衍生物的交联：取以上活化后的琼脂糖凝胶颗粒A，并按每克凝胶溶于1ml pH为6.8-8，0.2M的磷酸缓冲溶液中，加入30-50mg的脱-2-O硫酸化肝素衍生物，再加入2-6mg氰基硼氢化钠，在室温条件下剧烈摇动反应2-5天，过滤，滤液冻干回收，得肝素衍生物凝胶颗粒B；
(3) 琼脂糖凝胶颗粒的乙酰化：取以上肝素衍生物凝胶颗粒B，按每克凝胶溶于2 ml 0.2M乙酸钠溶液中，并加入1ml的乙酸酐，在0℃条件下搅动反应60min，而后在室温条件下，再加入1ml乙酸酐搅动反应60min；先用100ml纯净水水洗，再用100ml 0.5M NaCl洗，再充分水洗抽干得到肝素衍生物亲和色谱材料。
2.一种脱-6-O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
（1）琼脂糖凝胶颗粒的活化：取洗净抽干后的凝胶颗粒，按每1g凝胶溶于1-3ml的0.6M NaOH中，并且加入0.1-0.2ml 环氧氯丙烷，在40℃水浴摇床中反应2小时，再充分水洗，抽干，加入2倍体积的浓氨水，于40℃水浴、120rpm/min摇床中摇动2小时，充分水洗抽干备用, 得活化的琼脂糖凝胶颗粒A；
（2）活化的琼脂糖凝胶颗粒和脱-6-O硫酸化肝素衍生物的交联：取以上活化后的琼脂糖凝胶颗粒A，并按每克凝胶溶于1ml pH为6.8-8，0.2M的磷酸缓冲溶液中，加入30-50mg的脱-6-O硫酸化肝素衍生物，再加入2-6mg氰基硼氢化钠，在室温条件下剧烈摇动反应2-5天，过滤，滤液冻干回收,得肝素衍生物凝胶颗粒B；
(3) 琼脂糖凝胶颗粒的乙酰化：取以上肝素衍生物凝胶颗粒B，按每克凝胶溶于2ml 0.2M乙酸钠溶液中，并加入1ml的乙酸酐，在0℃条件下搅动反应60min，而后在室温条件下，再加入1ml乙酸酐搅动反应60min；先用100ml纯净水水洗，再用100ml 0.5M NaCl洗，再充分水洗抽干得到肝素衍生物亲和色谱材料。
3.一种脱-N位硫酸化再乙酰化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
（1）琼脂糖凝胶颗粒的活化：取洗净抽干后的凝胶颗粒，按每1g凝胶溶于1-3ml的0.6M NaOH中，并且加入0.1-0.2ml 环氧氯丙烷，在40℃水浴摇床中反应2小时，再充分水洗，抽干，加入2倍体积的浓氨水，于40℃水浴、120rpm/min摇床中摇动2小时，充分水洗抽干备用, 得活化的琼脂糖凝胶颗粒A；
（2）活化的琼脂糖凝胶颗粒和脱-N位硫酸化再乙酰化肝素衍生物的交联：取以上活化后的琼脂糖凝胶颗粒A，并按每克凝胶溶于1ml pH为6.8-8，0.2M的磷酸缓冲溶液中，加入30-50mg的脱-N位硫酸化再乙酰化肝素衍生物，再加入2-6mg氰基硼氢化钠，在室温条件下剧烈摇动反应2-5天，过滤，滤液冻干回收, 得肝素衍生物凝胶颗粒B；
(3) 琼脂糖凝胶颗粒的乙酰化：取以上肝素衍生物凝胶颗粒B，按每克凝胶溶于2ml 0.2M乙酸钠溶液中，并加入1ml的乙酸酐，在0℃条件下搅动反应60min，而后在室温条件下，再加入1ml乙酸酐搅动反应60min；先用100ml纯净水水洗，再用100ml 0.5M NaCl洗，再充分水洗抽干得到肝素衍生物亲和色谱材料。
4.一种脱-2-O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料，其特征在于：所述脱-2-O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料是由如权利要求1 所述的制备方法制备得到。
5.一种脱-6-O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料，其特征在于：所述脱-6-O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料是由如权利要求2 所述的制备方法制备得到。
6.一种脱-N位硫酸化再乙酰化肝素衍生物亲和色谱材料，其特征在于：所述脱-N位硫酸化再乙酰化肝素衍生物亲和色谱材料是由如权利要求3所述的制备方法制备得到。
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