[发明专利]一种密度感应淬灭菌的检测方法

权利要求书

1.一种密度感应淬灭菌的检测方法，其特征在于，所述的方法是将待检测菌株加入到溶解有AHL的、pH值为6.7的 PIPES缓冲液中制成待检液，再将待检液上清与添加有X-gal的A. tumefaciens A136报告菌的菌液进行反应；反应结束后检测反应液的OD492和OD630单位的值，并通过公式 (0.653×OD492-OD630)/(0.267×OD630-OD492)计算标准化β-半乳糖苷酶活性值，通过比较阴性对照的标准化β-半乳糖苷酶活性值进行差异显著性分析，最终确定待检测菌株是否为密度感应淬灭菌。

2.权利要求1所述的方法，其步骤如下：

1）待检测菌株的扩大培养

将待测菌株接种到液体培养基中，在28℃，170 rpm培养至稳定期获得待测菌液；

2）待检液的反应：在步骤1）制备的待测菌液中加入 pH值为6.7，浓度为1 M的PIPES缓冲液和C6-HSL，混匀28℃静置培养24小时； 

3）AHL分子的检测：

将添加有终浓度为250 μg/ml的X-gal的检测液与步骤2）的完成反应的待检液的上清混合，28℃静置培养12小时；检测OD492和OD630，然后按照(0.653×OD492-OD630)/(0.267×OD630-OD492)计算标准化β-半乳糖苷酶活性值，通过差异显著性分析，比较阴性对照的标准化β-半乳糖苷酶活性值，最终确定待检测菌株是否为密度感应淬灭菌；当待测菌的标准化β-半乳糖苷酶活性值显著小于阴性对照的标准化β-半乳糖苷酶活性值时，确定待测菌株为密度感应淬灭菌。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤2）中PIPES缓冲液在待检液中的体积浓度为10%，C6-HSL在待检液中的终浓度为0.01 mM。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤2）中的C6-HSL用C10-HSL、C12-HSL或C14-HSL替代，且C10-HSL、C12-HSL或C14-HSL在待检液中的终浓度为20 μM。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤2）中的C6-HSL用3-oxo-C6-HSL、C8-HSL、3-oxo-C8-HSL、3-oxo-C10-HSL、3-oxo-C12-HSL或3-oxo-C14-HSL替代，在待检液中的终浓度为2 μM。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤3）中的检测液与待检液上清的体积比为19：1。