[发明专利]一种基于LAMP技术快速检测灰葡萄孢的方法有效
| 申请号： | 201310112983.3 | 申请日： | 2013-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN103276057A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 周明国;葛常艳;段亚冰;张晓柯;王建新;陈长军 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210095 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 lamp 技术 快速 检测 葡萄 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于LAMP技术快速检测灰葡萄孢的方法，步骤是：
(1)运用两对特异性引物对待鉴定真菌的基因组DNA进行LAMP恒温扩增。其中所述的两对特异性引物的碱基序列分别是：
外引物对：
F3：CTACACAACGACCACAGT
B3：CCACCAGGTAGTTTCAATCC
内引物对：
FIP：GCCCTCCAGATAATCCATCTATGG-CCCGCGACAATATCATCA
BIP：CATGCGACCTCCACCACAAA-TTCTTGCGCTTAGTCCAC
(2)对上述LAMP扩增产物观察其颜色变化，并在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果；
(3)鉴定是否为灰葡萄孢菌株；如果LAMP扩增产物显示天蓝色，这时电泳图谱应为梯状条带，判定为灰葡萄孢菌株；如果扩增产物为紫色，这时电泳图谱无条带扩增，判定为非灰葡萄孢菌株。
2.根据权利要求1所述快速检测灰葡萄孢的方法，其特征在于：步骤(1)所述的LAMP反应总体积为25μL，反应体系是：
3.根据权利要求1所述快速检测灰葡萄孢的方法，其特征在于：步骤(1)所述的LAMP反应恒温扩增条件是：63℃ 45min，80℃ 10min。
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