[发明专利]从玉米中分离出来的PHR基因及其克隆方法和应用无效
| 申请号： | 201310115600.8 | 申请日： | 2013-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN103215277A | 公开（公告）日： | 2013-07-24 |
| 发明（设计）人： | 高世斌;苏顺宗;聂治;吴玲;刘丹;何春萌;周树峰;林海建;黄青;卢艳丽;刘海岚;田跃辉;易双 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/10;C07K14/415;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 611130 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 玉米 分离 出来 phr 基因 及其 克隆 方法 应用 | ||
1.从玉米中分离出来的PHR基因，其特征在于，包括ZmPHR1和ZmPHR2，序列如SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20所示。
2.根据权利要求1中所述的PHR基因，其特征在于，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示。
3.权利要求1或2所述的PHR基因的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取3叶期的耐低磷玉米自交系178幼苗，采用Trizol试剂盒提取总RNA；2）RNA反转录成cDNA：5×PrimeScriptTM Buffer2μL，PrimeScriptTM RT Enzyme MixI0.5μL，OligodT Primer(50μM)0.5μL，Random6mers(100μM)2μL，Total RNA2μL，RNase Free dH2O3μL；37℃反应15min；85℃放置30s终止反应；3）PCR扩增：分别用SEQ ID NO：1-4所示的引物从cDNA中扩增目的基因，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后切下目的片段，用天根的琼脂糖DNA分离试剂盒回收目的片段；4）目的基因克隆：将回收的目的片段和宝生物的pMD19-T载体连接，然后将连接产物转化入大肠杆菌DH5α，经菌液PCR和质粒PCR鉴定出阳性克隆，将阳性克隆进行DNA测序。
4.权利要求1或2中所述的PHR基因在耐低磷植物新品种的培育中的应用。
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