[发明专利]水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法有效
| 申请号： | 201310119561.9 | 申请日： | 2013-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN103205496A | 公开（公告）日： | 2013-07-17 |
| 发明（设计）人： | 肖红梅;刘佳;宋尚新;刘梅;张艳芳;索娜;江玲 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;傅婷婷 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水稻 加工品 bt 基因 快速 检测 方法 | ||
1.水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法,其特征在于包含如下步骤：
（1）提取水稻或水稻加工品基因组DNA；
（2）以步骤（1）提取的基因组DNA为模板，以上游外引物F3:SEQ ID NO.1、下游外引物B3：SEQ ID NO.2、上游内引物FIP：SEQ ID NO.3、下游内引物BIP：SEQ ID NO.4进行LAMP扩增；
（3）扩增产物用两种方法进行检测：A.2%琼脂糖凝胶电泳，电泳完毕，凝胶成像系统拍照成像，如果电泳结果呈现LAMP典型的梯状条带，则说明水稻或水稻加工品中含有Bt基因；B.取15μL反应产物，加入2μL SYBR Green Ⅰ染料，片刻后对结果直接进行可视化观察，若反应液显示绿色荧光，则样品中含有Bt基因，若显示浅橙色则为阴性结果。
2.根据权利要求1所述的水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法,其特征在于所述的水稻加工品为大米、米饭或米酒。
3.根据权利要求1所述的水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法,其特征在于所述的LAMP反应体系为：10×Thermopol反应缓冲液2.50μL，25mMMgCl23.00μL，20mM dNTPs3.50μL，8U/μL Bst DNA聚合酶0.80μL，20μM上游内引物FIP1.60μL，20μM下游内引物引物BIP1.60μL，10μM上游外引物F30.25μL，10μM下游外引物B30.25μL，5M甜菜碱1.00μL，100ng/μL DNA模板1.00μL，无核酸酶纯水9.50μL，共计25μL。
4.根据权利要求1所述的水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法,其特征在于所述的LAMP反应程序为：61℃恒温反应60min，80℃保温10min终止反应。
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