[发明专利]一种利用SSR分子标记鉴定苎麻品种的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物品种的分子生物学鉴定方法技术领域，具体涉及一种利用SSR分子标记鉴定苎麻品种的方法。

背景技术

苎麻(Boehmeria nivea L.Gaud)，又叫“中国草”，起源于中国，为荨麻科苎麻属的多年生宿根性草本植物，是中国特色的天然纺织原料^[1]。除传统的纤维价值外，苎麻的药用价值、饲料用途、水土保持、工业原料、生物能源等多功能用途已开始受到关注^[2-5]。迄今为止，我国是收集、保存苎麻属种质资源最多的国家，仅国家种质长沙苎麻圃就拥有2000多份材料，其中的栽培资源已广泛为育种和生产所利用^[6]。

在收集种质资源的过程中发现，苎麻存在同物异名和同名异物现象。而且，随着选育品种的增加，面对如此多的新种质，进行品种鉴定不仅对苗木繁育具有重要意义，也是保护这些品种知识产权的需要。传统上苎麻一般采用形态性状进行种质鉴定。采用田间调查品种性状的方法，时间长，费用高；且苎麻为宿根性多年生植物，生命周期长，种质资源间的形态差异性状少，利用传统的形态学性状鉴定方法区分种质较为困难。随着DNA分子标记的不断发展和完善，从分子水平上对种质的遗传特异性快速、准确、经济、不受环境条件影响的鉴定成为可能。

我们课题组2010年利用ISSR分子标记技术构建了42份苎麻种质的分子身份证^[7]以区分和鉴定品种。但是ISSR标记扩增结果相对不稳定，重复性差。SSR（simple sequence repeats）分析技术具有染色体上分布均匀、多态性丰富、共显性、分辨率高和易于检测等优点^[8]，自开发以来就成为最为有效构建许多作物指纹图谱的工具^[9]。高运来等^[10]利用43对SSR引物对黑龙江省6个积温带的83个大豆品种构建了分子身份证。王黎明等^[11]利用41对SSR引物构建了142份甜高粱的分子身份证。陈昌文等^[12]利用8对SSR引物构建了176份桃种质资源的分子身份证。

目前，尚未有利用SSR分子标记构建苎麻分子身份证的方法。

发明内容

本发明目的旨在创立一种利用SSR分子标记鉴定苎麻品种的方法。

一种利用SSR分子标记鉴定苎麻品种的方法，包括以下步骤：

（1）提取各样品苎麻种质DNA；

（2）利用设计的8对苎麻EST-SSR引物，扩增苎麻的基因组DNA；

（3）记录每个样品每对引物的DNA扩增带型；

（4）根据DNA扩增带型区分鉴定苎麻品种；

所述的8对苎麻EST-SSR引物序列如下：

ibfc50：F:AACAATCCAGGAGTGGCAATC

R:ACAAGCGAAGATCGTCTCATC；

ibfc40F:TGTATAGAACTGAGTAAATGATTG

R:CAACTTTCTTAAACCACTTTCG；

Ibfc27F:AGCCAGGTTCCAGAAGTCC

R:CATAATCACAAAGTCTCGGTTCC；

Ibfc11F:GCGGAGGCTTAATTTGCTTTG

R:ACTCAATACATACACGGCACTAG；

ibfc65F:ACGAACCACAACACAGAGAG

R:ACGAGGGAACACCAGAGAG；

ibfc62F:GAAACTATTTCCACCAACAAAG

R:ACACACATTCCTACACACC；

ibfc53F:GGCTCAAGTTTGCTCATAGATTC

R:CGGCTTCGCTTTAGGATTTG；

ibfc20F:AGTGCGGAGATAACTGTTC

R:GGCTACTTTATTCTAAACCAAAC。

PCR反应体系:20μL，