[发明专利]p66Shc重组腺病毒载体及构建和应用

权利要求书

1.一种p66Shc重组腺病毒载体，所述载体中插入的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的一种p66Shc重组腺病毒载体的构建方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

(1)设计上游引物SEQ ID NO：2：5’-gtaactataacggtc atggatctcctgccc-3’；下游引物SEQ ID NO：2：5’-attacctctttctcc tcacagtttccgctcca-3’，上下游引物5’端分别包含与pAdeno X-CMV载体上重组位点两端同源的15bp碱基对；

(2)p66Shc基因PCR纯化物与pAdenoX-CMV载体在体外重组酶(In-Fusion HD Enzyme)的作用下进行同源重组连接；

(3)阳性重组腺病毒质粒的鉴定，片段在34kb左右者做测序鉴定。

3.根据权利要求1所述的一种p66Shc重组腺病毒载体具备可特异性抑制肿瘤细胞生长而对正常细胞生长无明显抑制作用的特点。

4.根据3的p66Shc重组腺病毒载体，其中肿瘤细胞选取人子宫颈癌肿瘤细胞系，正常细胞选取人脐静脉内皮细胞。

5.根据3或4的p66Shc重组腺病毒载体，其中人脐静脉内皮细胞细胞是原代细胞。

6.根据3到5任何一项的p66Shc重组腺病毒载体存在于细胞裂解液中。

7.根据6的细胞裂解液，其中细胞是HEK293A细胞系。

8.根据6或7的细胞裂解液，其裂解前的细胞数是3×10⁶。

9.根据6至8的细胞裂解液，其加入细胞培养基的量至少0.01μl/10³细胞。