[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry34B的编码基因，其特征在于，具有序列表中SEQ ID №：1中第5179-5574位核苷酸序列。

2.一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的编码基因，其特征在于，具有序列表中SEQ ID №：1中第5071-5601位核苷酸序列。

3.含有权利要求1或2所述的编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌；所述重组载体优选为重组表达载体或重组克隆载体。

4.一种Bt Cry34B融合蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1）将SEQ ID №.1中第5173-5580位核苷酸所示序列的DNA片段插入pET28a表达载体中，得到重组表达载体；

2）将所述重组表达载体导入大肠杆菌BL21（DE3），得到重组菌；

3）培养所述重组菌，并进行诱导表达，收集菌体；裂解菌体，即得。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3）包括以下步骤：

a）将所述重组菌接种于含有50ug/mL Kan的LB培养基，37℃振荡培养16h，得到培养物；

b）将所述培养物按1%的体积接入含50ug/mL Kan的LB培养基，37℃振荡培养3小时，得到培养液

c）向所述培养液中加入IPTG至终浓度为1mM，30℃震摇培养6小时；

d)将步骤c）所得产物4℃，10000g离心10min，收集菌体。

6.一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID №.2所示。