[发明专利]一种抗体标记信号或核酸探针标记信号放大的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体标记信号或核酸探针标记信号放大的方法，即将与鲎试剂发生特异性反应的革兰氏阴性细菌的脂多糖（LPS）或真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖标记抗体或核酸，用于免疫分析过程的信号放大，属于免疫分析技术领域。

背景技术

抗体放大系统是将具有高灵敏度、可检测的能发生特异性反应的物质标记到抗体或抗原分子上，通过标记物的反应，显示检测物质的含量，同时通过信号的增强，放大检测的信号，提高待检测物质的检测灵敏度。

目前的标记物包括荧光素、酶（发色性底物显色或化学发光等）和放射性核素等，用这3种标记物进行标记的免疫检测技术被称为3大免疫标记技术。除此之外，使用的免疫标记物还有化学发光物质、铁蛋白和胶体金等。目前采用放射性核素标记的检测灵敏度最高，可达pg级，其他方法灵敏度比放射性核素标记低1到3个数量级。本发明采用一种新型的标记物，可与鲎试剂特异性反应的分子，将检测灵敏度提高到放射性核素标记的水平。鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素（以下简称LPS）和（1,3）-β-D-葡聚糖（以下简称葡聚糖）。目前主要的检测细菌内毒素和（1,3）-β-D-葡聚糖的方法有凝胶法、浊度法和比色法。

发明内容

 本发明所要解决的技术问题是：提供一种检测灵敏度达到放射性核素标记水平的免疫检测方法，本发明提供一种革兰氏阴性细菌的脂多糖或真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖标记抗体信号放大方法或核酸探针信号放大方法。

   本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

1、本发明首先提供了一种抗体标记信号放大的方法，其中用于标记抗体的标记物为能与鲎试剂发生特异性反应的革兰氏阴性细菌的脂多糖或真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖。

所述信号放大的检测是采用细菌细胞壁脂多糖通过化学键与抗体进行联接来作为抗体检测过程的检测放大信号。

所述信号放大的检测方法是采用真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖通过化学键与抗体进行联接来作为抗体检测过程的检测放大信号。

所述检测放大信号，是指细菌细胞壁脂多糖与鲎试剂发生的特异性凝固反应或特异性颜色反应。

所述检测放大信号，是指真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖与鲎试剂发生的特异性凝固反应或特异性颜色反应。

2、本发明另外还提供了一种核酸探针标记信号放大的方法，其中用于核酸标记的标记物为能与鲎试剂发生特异性反应的革兰氏阴性细菌的脂多糖或真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖。

所述信号放大的检测方法是采用细菌细胞壁脂多糖通过化学键与寡核苷酸进行联接来作为核酸互补杂交检测过程的检测放大信号。

所述信号放大的检测方法是采用真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖通过化学键与寡核苷酸进行联接，作为核酸互补杂交检测过程的检测放大信号。

所述检测放大信号是指细菌细胞壁脂多糖与鲎试剂发生的特异性凝固反应或特异性颜色反应。

所述检测放大信号是指真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖与鲎试剂发生的特异性凝固反应或特异性颜色反应。

     本发明中各溶液具体的配置方法如下：

LPS溶液的制备：称取脂多糖（LPS）0.01g，溶于1 mL 0.1mol/L的NaCO₃溶液中溶解，然后加入1 mL 新配置的0.1mol/L的NaIO₄溶液，55℃水浴反应60-120分钟后，加入40微升异丙醇，放入4℃冰箱30分钟，12000rpm/min离心10分钟，弃上清液，沉淀用1 mL纯净水洗涤2次，每次5秒钟，后加入1 mL 0.1mol/L的NaCO₃溶液溶解，制备LPS溶液。

葡聚糖溶液的制备：称取葡聚糖 0.01g，加入1 mL 0.1mol/L的NaCO₃溶液，充分后加入1 mL 新配置的0.1mol/L的NaIO₄溶液，55℃水浴反应60-120分钟后，加入40微升异丙醇，放入4℃冰箱30分钟，12000rpm/min离心10分钟，弃上清液，沉淀用1 mL纯净水洗涤2次，每次5秒钟，后加入1 mL 0.1mol/L的NaCO₃溶液，充分溶解，即可制得葡聚糖溶液。