[发明专利]一种多肽的液相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽的合成方法，具体涉及一种多肽的液相合成方法。

背景技术

缺血性脑血管病（缺血性脑卒中）是世界上发病率、死亡率、致残率最高的疾病之一，极大地威胁着人类、特别是老年人地健康和生活质量，已经成为全球社会医疗资源的巨大负担。目前国内外应用于治疗缺血性脑血管病地有效药物很少，研发新型药物用于缺血性脑血管病的防治具有重要意义。

中国专利（CN101361961）描述了单核细胞移动抑制因子（MLIF）及其剪接体能显著降低小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤面积，并显著改善小鼠脑缺血后的神经行为。单核细胞移动抑制因子（MLIF）为从溶组织内阿米巴的分泌液中提取的五肽，其氨基酸序列为Met-Gln-Cys-Asn-Ser，但在发明人了解的范围内，并未发现该五肽的合成方法被报道。

MLIF的结构式见(Ⅰ)，通常会以盐的形式存在，可以是内盐(Ⅱ)式,或与酸组合成盐（Ⅲ）或与碱组合成盐（Ⅳ），具体如下列各式所示：

发明内容

本发明的目的在于提供一种多肽的液相合成方法，该方法采用人工合成方式，原料和设备成本低，产率高，可适合大规模生产。

发明人在研究五肽的液相合成方法过程中，尝试了多种可能的合成方法，例如先合成二肽片段Asn-Ser(tBu)-OtBu和三肽片段Met(Boc)-Gln-Cys(Trt)，再将二肽片段与三肽片段连接；或者先合成二肽片段Met(Boc)-Gln和三肽片段Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu，再将二肽片段与三肽片段连接；或者以Met→Gln→Cys→Asn→Ser的顺序依次合成该五肽，但发现均存在反应产物分离困难，产率较低的问题。经过大量的实验和探索，发明人发现，依如下技术方案合成此五肽效果较为理想。

本发明的上述目的是通过如下技术方案来实现的：一种多肽的液相合成方法，含以下步骤：

以叔丁基-丝氨酸叔丁酯或其盐酸盐为起始原料，先与N-苄氧羰基-L-天冬酰胺进行缩合反应，反应产物脱去N-苄氧羰基得到Asn-Ser(tBu)-OtBu二肽，将Asn-Ser(tBu)-OtBu二肽与N-芴甲氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸进行缩合反应，反应产物脱去N-芴甲氧羰基得到Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu三肽；将Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu三肽与N-芴甲氧羰基-L-谷氨酰胺进行缩合反应，反应产物脱去N-芴甲氧羰基得到Gln-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu四肽；将Gln-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu四肽与N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸进行缩合反应，得到Met(Boc)-Gln-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu五肽；将Met(Boc)-Gln-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu五肽上的保护基(Boc)、(Trt)和(tBu)脱去得Met-Gln-Cys-Asn-Ser五肽。

具体的，本发明提供的多肽的液相合成方法，含以下步骤：

(1)以叔丁基-丝氨酸叔丁酯或其盐酸盐为起始原料，在有机溶剂、缩合剂和有机胺作用下，与N-苄氧羰基-L-天冬酰胺进行反应，反应产物经含洗涤、干燥工序处理，得Asn(Cbz)-Ser(tBu)-OtBu二肽；

(2)采用脱保护试剂将Asn(Cbz)-Ser(tBu)-OtBu二肽上的N-苄氧羰基(Cbz)脱去，得到Asn-Ser(tBu)-OtBu二肽；

(3)将Asn-Ser(tBu)-OtBu二肽与N-芴甲氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸在有机溶剂、缩合剂作用下进行反应，反应产物经含洗涤、干燥、重结晶工序处理，得Fmoc-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu三肽；

(4)采用脱保护试剂将Fmoc-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu三肽上的N-芴甲氧羰基Fmoc脱去，得到Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu三肽；

(5)将三肽Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu与N-芴甲氧羰基-L-谷氨酰胺在有机溶剂、缩合剂作用下进行反应，反应产物经含洗涤、干燥工序处理，得Fmoc-Gln-Cys(Trt)-Asn-Ser(tBu)-OtBu四肽；