[发明专利]糖化血红蛋白的纯化工艺有效
| 申请号： | 201310129265.7 | 申请日： | 2013-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN103254306A | 公开（公告）日： | 2013-08-21 |
| 发明（设计）人： | 蔡豪斌;李珏燕;苏时萍 | 申请（专利权）人： | 桂林英美特生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/805 | 分类号： | C07K14/805;C07K1/16 |
| 代理公司： | 桂林市持衡专利商标事务所有限公司 45107 | 代理人： | 唐智芳 |
| 地址： | 541004 广西壮族自*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 糖化 血红蛋白 纯化 工艺 | ||
1.糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:取血红蛋白液，上CM-SepharoSeFastFlow层析柱，经流动相梯度洗脱，收集洗脱峰，对洗脱峰进行检测，收集HbAlc含量≥99%的部分，从而获得高纯度HbAlc抗原;其中，所述的流动相由A液和B液组成，具体为:
A液:15～25mmol/L NaAc，pH＝5.6～5.8;或者是15～25mmol/LNaAc+0.01～0.05%NaN3，pH＝5.6～5.8;
B液:15～25mmol/L NaAc+280～320mmol/L NaCl+0.01～0.05%NaN3，pH=5.6～5.8。
2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:所述流动相的组成中，
A液:20mmol/L NaAc+0.03%NaN3，pH＝5.7;
B液:20mmol/L NaAc+300mmol/L NaCl+0.03%NaN3，pH＝5.7。
3.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:检测采用高效液相色谱法。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:血红蛋白液上CM-Sepharose FaSt Flow层忻柱时，流动相的洗脱条件为:
1)在0.5倍柱体积洗脱液的时间内:A液:100%→70～90%；
2)在1倍柱体积洗脱液的时间内:A液:70～90%，B液:30～10%；
3)在1倍柱体积洗脱液的时间内:A液:60～70%，B液:40～30%；
4)在1倍柱体积洗脱液的时间内:A液:60～70%→40～30%，B液:40～30%→60～70%；
5)在2倍柱体积洗脱液的时间内:A液:30～40%。
5.根据权利要求4所述的糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:流动相的洗脱条件为:
1)在0.5倍柱体积洗脱液的时间内:A液:100%→80%；
2)在1倍柱体积洗脱液的时间内:A液:80%，B液:20%；
3)在1倍柱体积洗脱液的时间内:A液:65%，B液:35%；
4)在1倍柱体积洗脱液的时间内:A液:65%→35%，B液:35%→65%;
5)在2倍柱体积的洗脱液的时间内:A液:35%。
6.根据权利要求1～3中任一项所述的糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:用SOURCEl5S4.6/100PE离于交换树脂HPLC法检测HbAlc的含量。
7.根据权利要求1～3中任一项所述的糖化血红蛋白的纯化工艺，其特征在于:所述的血红蛋白液为经过糖化或未经过糖化的血红蛋白液。
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