[发明专利]蔗糖酶-DNA复合物及其制备方法、相关试剂盒及配合血糖仪检测HBV不同分型的方法

权利要求书

1.一种可用于血糖仪检测乙型肝炎病毒不同分型的蔗糖酶-DNA复合物，所述蔗糖酶-DNA复合物为链式分子结构，所述蔗糖酶-DNA复合物的分子一端为蔗糖酶，所述蔗糖酶-DNA复合物的分子另一端为可杂交于乙型肝炎病毒不同基因型上的辅助探针，所述蔗糖酶上含有氨基，所述辅助探针上修饰有巯基；所述蔗糖酶和辅助探针之间是通过4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐作为原料反应后生成的连接臂进行连接，所述连接臂包括4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷基团；所述辅助探针的核苷酸序列为：

5’-SH-(T)₁₀ATGTATACCCAAAGACAAAAGAAAATTG-3’。

2.一种用于配合血糖仪检测乙型肝炎病毒不同分型的试剂盒，所述试剂盒包括微流控芯片和报告探针溶液，所述微流控芯片主要由底片和盖片上下叠加而成，所述底片和盖片之间设有液流通道，其特征在于：该液流通道包括主通道和多个与主通道分别交汇的侧通道，各侧通道相互独立分隔开，不同侧通道的内表面中分别固定有针对乙型肝炎病毒不同分型的捕获探针；所述报告探针溶液为权利要求1所述蔗糖酶-DNA复合物配制成的溶液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述乙型肝炎病毒不同分型包括HBV-B、HBV-C、HBV-D中的至少两种；

针对所述HBV-B基因型的捕获探针的核苷酸序列为：

5’-GTAACAGCGGCATAAAGGGACTCAAGATGTTG(T)₁₀-biotin-3’；

针对所述HBV-C基因型的捕获探针的核苷酸序列为：

5’GTAATAGAGGTAAAAAGGGACTCAAGATGTTG(T)₁₀-biotin-3’

针对所述HBV-D基因型的捕获探针的核苷酸序列为：

5’-GTAACAGCGGTAAAAAGGGACTCAAGATGCTG(T)₁₀-biotin-3’。

4.一种如权利要求1所述的蔗糖酶-DNA复合物的制备方法，包括以下步骤：

(a)将0.1mM～2mM的所述辅助探针的溶液、0.75M～2M的磷酸盐缓冲液和15mM～60mM的磷酸三(β-氯乙基)酯混合，室温下充分孵育，再使用超滤离心管反复离心得辅助探针溶液；

(b)将10mg/mL～20mg/mL的蔗糖酶溶液与4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐振荡混合，混合时保证4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐充分过量，室温下振荡反应完全，然后用超滤离心管反复离心，得到sulfo-SMCC活化蔗糖酶溶液；

(c)将上述步骤(a)得到的辅助探针溶液和步骤(b)制得的sulfo-SMCC活化蔗糖酶溶液混合，混合时其中的辅助探针与蔗糖酶的摩尔比控制在(5～20)∶1，室温下反应完全，再用超滤离心管反复离心，即得到蔗糖酶-DNA复合物。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

所述步骤(a)中，充分孵育的时间控制在1h～2h，所述超滤离心管为3K超滤离心管；

所述步骤(b)中，控制蔗糖酶与4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐的摩尔比为1∶(100～1000)，振荡反应完全的时间为1h～5h，所述超滤离心管为30K超滤离心管；

所述步骤(c)中，室温下反应完全的时间为36h～54h，所述超滤离心管为30K超滤离心管。