[发明专利]CYP4V2基因突变体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学分子生物学领域，具体地，涉及分离的CYP4V2突变体的核酸，分离的多肽，以及筛选易感原发性结晶样视网膜变性疾病的生物样品的方法、筛选易感原发性结晶样视网膜变性疾病的生物样品的系统，用于筛选易感原发性结晶样视网膜变性疾病的生物样品的试剂盒以及筛选治疗或预防原发性结晶样视网膜变性疾病的药物的方法。 

背景技术

原发性结晶样视网膜变性（Bietti’s crystalline dystrophy，在本文中有时也简称为“BCD”）是常见的遗传性致盲疾病，在全世界的发病率约为1/24000，其高发人群是中国人，在我国的发病率约为1/4000。BCD患者通常20—30岁发病，40—50岁致盲，目前已经成为威胁全球青年和中年人群视觉功能、视觉质量的主要眼部疾病，最终严重影响患者的生活质量，给家庭和社会带来了巨大的负担。BCD是由于视网膜感光细胞（包括视锥细胞和视杆细胞）和视网膜色素上皮细胞变性,伴随进行性脉络膜血管萎缩、硬化而导致的致盲性眼病。 

BCD的遗传方式主要是常染色体隐性遗传（autosoma recessive BCD，简称为ARBCD）。到目前为止，通过连锁分析或候选基因筛选已经确定了1个基因位点，并已经得到克隆(RetNet:http://www.sph.uth.tmc.edu/retnet/sum-dis.htm)。尽管现在发现了一个BCD致病基因，但仍存在着相当一部分未知致病基因位点，预计在人类基因组中可能仍然存在多个位点与BCD相关。 

因此，目前对原发性结晶样视网膜变性疾病的研究仍有待深入。 

发明内容

以下概括描述本发明要求保护的技术方案： 

1.根据本发明的一方面，本发明提供一种分离的原发性结晶样视网膜变性疾病的CYP4V2新突变致病基因，其特征在于，所述突变致病基因的核苷酸序列与编码野生型CYP4V2蛋白的基因相比，第219位碱基发生T>A的突变。 

本发明通过Sanger外显子测序和基因突变验证的方法确定了原发性结晶样视网膜变性疾病（BCD）新的致病基因突变（CYP4V2c.219C>G p.F73L）。 

CYP4V2基因突变体 

根据本发明的实施例，与SEQ ID NO：1相比，该核酸具有p.F73L突变。在本文中所使用的表达方式“编码CYP4V2突变体的核酸”，是指与编码CYP4V2突变体的基因相对应的核 酸物质，即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与CYP4V2突变体的编码基因相对应的脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本发明的一个具体示例，前面所述的编码CYP4V2突变体的核酸为DNA。 

根据本发明的实施例，发明人确定了CYP4V2基因的新突变体，这些新突变体与原发性结晶样视网膜变性疾病的发病密切相关，从而通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感原发性结晶样视网膜变性疾病，也可以通过检测这些突变体在生物体中是否存在，可以有效地预测生物体是否易感原发性结晶样视网膜变性疾病。 

该编码CYP4V2突变体的核酸，是本申请的发明人通过Sanger法测序验证方法确定的原发性结晶样视网膜变性疾病的致病基因上的新突变。CYP4V2基因突变位点如：c.802-8_810del17insGC,c.992A>C,and c.1091-2A>G已经在其他发表的文章中被证实与BCD相关，但本次发现的突变位点为新的，在现有技术中并未被提到。 

野生型CYP4V2基因的核苷酸序列具有4711nt,其中第305～1882nt之间为编码区（如Seq ID No.1所示），其编码Theoretical pI/Mw:7.19/60.72KDa大小的CYP4V2蛋白(编码区)，该蛋白质含有525个氨基酸，具有Seq ID No.2所示的氨基酸序列。 

发明人发现的新突变体与SEQ ID NO：2相比，具有p.F73L突变，即相对于野生型CYP4V2基因，本发明的CYP4V2基因突变体的cDNA中第219位的T突变为A，由此，其所编码的产物与CYP4V2蛋白（SEQ ID NO：2）相比，具有p.F73L突变，即219位的F（苯丙氨酸）突变为L（亮氨酸）。