[发明专利]一种检测仙台病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用有效
| 申请号： | 201310131607.9 | 申请日： | 2013-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN103215381A | 公开（公告）日： | 2013-07-24 |
| 发明（设计）人： | 肖庚富;张哲;郑从义 | 申请（专利权）人： | 武汉珈创生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 仙台病毒 荧光 定量 pcr 试剂盒 应用 | ||
1.一种检测仙台病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)RNA提取液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d) RNA酶抑制剂、e) 引物、f) 标准阳性DNA模板、g) SYBR Green I实时荧光定量PCR反应液，其特征在于：引物序列分别为正义引物：5’-ACCTATGGTCAACAAGAGTCCGCT-3’，反义引物：5’-CGTGATTGCCTTCACCAGCACAAT-3’，扩增子大小为142bp，标准阳性DNA模板由已插入仙台病毒保守的NP蛋白编码区142bp的pTA2载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。
2.根据权利要求1所述的一种检测仙台病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的RNA酶抑制剂提取液是由细胞裂解液、氯仿、异丙醇、75%质量体积比乙醇、灭菌的双蒸水组成。
3.根据权利要求1所述的一种检测仙台病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的SYBR Green I实时荧光定量PCR反应液是由2×iTaq SYBR Green Supermix 、10μM的正义引物和反义引物和灭菌的双蒸水组成。
4.根据权利要求1所述的一种检测仙台病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的标准阳性DNA模板核苷酸序列为：
Acctatggtcaacaagagtccgcttttccaggggcaacgagatgctgcagaccctgatacgctccttcaaatctatgggtatccggcatgcctaggggcaattattgtccaggtctggattgtgctggtgaaggcaatcacg。
5.权利要求1所述的一种仙台病毒的荧光定量PCR试剂盒在检测仙台病毒药物中的应用。
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