[发明专利]一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用无效
| 申请号： | 201310131617.2 | 申请日： | 2013-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN103215382A | 公开（公告）日： | 2013-07-24 |
| 发明（设计）人： | 肖庚富;张哲;郑从义 | 申请（专利权）人： | 武汉珈创生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 小鼠 痘病毒 荧光 定量 pcr 试剂盒 应用 | ||
1.一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)DNA提取液、b)引物、c)标准阳性模板、d) SYBR Green I实时荧光定量PCR反应液，其特征在于：从细胞样品中提取DNA，进行荧光定量PCR反应，同时引入标准阳性模板，引物序列分别为正义引物：5’-GCCGTCATTCCTAAAAAAAGTGGT-3’，反义引物：5’-ATCAAAGCCTTGTTGTCTCCGA-3’，扩增子大小为176bp，标准阳性DNA模板由已插入小鼠痘病毒保守的病毒核心DNA连接蛋白编码区176bp的pTA2载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。
2.根据权利要求1所述的一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的DNA提取液是由5mL 100mM Tris-HClpH=8.5、0.5mL 0.5M EDTA、1mL 10%SDS、2mL5M NaCl、0.25mL 0.2mg/mL蛋白酶K和41.25mL 灭菌的双蒸水组成。
3.根据权利要求1所述的一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的SYBR Green I实时荧光定量PCR反应液由2×iTaq SYBR Green Supermix 、10μM的正义引物和反义引物，以及灭菌的双蒸水组成。
4.根据权利要求1所述的一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的标准阳性DNA模板核苷酸序列为：gccgtcattcctaaaaaaagtggtaggagaaagaataagaacatggttatcttccgtcaaggatcatcgcctatcttgtgtattttcgaaactcgtaaaaagattaatatttataaagaaaatatggaatccgcagctactgagtatacacctatcggagacaacaaggctttgat。
5.权利要求1所述的一种荧光定量PCR试剂盒在检测小鼠痘病毒药物中的应用。
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