[发明专利]一种洋葱成骨肽的提取方法

权利要求书

1.一种洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：所述方法为采用低温醇提工艺，制得洋葱多肽粗提浸膏，将浸膏依次经大孔树脂色谱法、硅胶色谱法、Sephadex LH20色谱法分离提纯，得到含有洋葱成骨肽的多肽精提物，再经冷冻干燥制得干粉保存。

2.按照权利要求1所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于，具体步骤为：

A）、取新鲜洋葱，洗净、切块、低温干燥、粉碎；

B）、对洋葱粉进行醇提得浸膏；

C）、将浸膏用2～3倍水溶解，然后用与水同体积的有机溶剂萃取2～4次，浓缩水溶液得到洋葱多肽粗提物1；

D）、将洋葱多肽粗提物1上大孔树脂色谱柱后，用50%乙醇洗脱至柱无色，洗脱液减压回收乙醇得洋葱多肽粗提物2，其中大孔树脂为非极性或弱极性聚苯乙烯大孔树脂；

E）、将洋葱多肽粗提物2上硅胶色谱柱后，用体积比为CHCL₃：MeOH：H₂O=7:3:0.5的洗脱液梯度洗脱，流速为2～3ml/分钟，收集薄层色谱紫外光检测R_f为0.5～0.6的洗脱液，减压回收洗脱液得洋葱多肽粗提物3；

F）、将洋葱多肽粗提物3上Sephadex LH20凝胶色谱柱，用CH₃OH：H₂O=1:1的洗脱液洗脱，流速为1～2ml/分钟，收集薄层色谱紫外光检测R_f为0.55的洗脱液，减压浓缩得洋葱多肽精提物，所述Sephadex LH20为羟丙基葡聚糖凝胶；

G）、洋葱多肽精提物经冷冻干燥制得干粉保存。

3.按照权利要求2所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：在操作步骤B～G时温度低于80℃。

4.按照权利要求2所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：步骤E和F的薄层色谱条件相同，展开剂是体积比为正丁醇：水：醋酸=4:5:1，显色剂是5%硫酸乙醇液。

5.按照权利要求2所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：在步骤C中所用的有机溶剂是乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正丁醇、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷中的一种或两种以上。

6.按照权利要求2所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：在步骤D中所用的大孔树脂色谱柱为HPD-100、D-101、AB-8、HP-200或HPD-300。

7.按照权利要求1～6任一所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：所用洋葱为紫皮洋葱。

8.按照权利要求2所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：在醇提时，用与新鲜洋葱等重量的体积浓度为70～90%的乙醇常温浸泡2周，减压回收乙醇得浸膏。

9.按照权利要求2所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：步骤A所述低温干燥的温度低于80℃。