[发明专利]一种洋葱成骨肽的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于保健品生产技术领域，具体涉及一种提取洋葱成骨肽的方法，用于高效、高质、无污染地提取洋葱成骨肽，所得洋葱成骨肽能有效改善骨质疏松症状并能预防骨质疏松的发展。

背景技术

骨质疏松症(osteoporosis)是一种系统性骨病，以骨量减少、骨的微观结构退化为特征，致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨胳疾病。世界卫生组织发出警告：骨质疏松症已紧随心血管疾病之后，成为第二个威胁人类健康的主要疾病。据调查，目前我国1.5亿60岁以上老年人群约有9000万骨质疏松患者（占60%），60-69岁发病率女性为50%-70%，男性为30%。骨质疏松症最大的危害是易导致骨折，尤其是中老年人髋部骨折，多数都不能自理需人照顾，死亡率约为15%。

骨质疏松症是一种多因素所致的慢性疾病，内分泌失调、营养不良、年龄增加、遗传因素、烟酒、药物及疾病均会引发骨质疏松症。究其发病机制是骨吸收增强和/或骨形成不足导致的骨矿含量下降、骨密度下降。骨骼有两种主要细胞—即成骨细胞和破骨细胞。骨的代谢过程，在人30岁前伴人的成骨细胞成骨过程占优势因此生长发育是以合成代谢为主，人体正常需要补充骨合成的原料钙制剂。30岁后骨生长发育处于相对稳定阶段，即成骨细胞和破骨细胞处于平衡。这阶段维持骨代谢的正常，必须补充正常每日丢失的钙量。60岁以后人的骨代谢以破骨细胞占优势，每天钙质大量丢失，如不能有效补充钙剂并在骨质上沉积就必然产生骨质疏松。

一直以来，人们把骨质疏松症的预防与治疗的重点放在补钙上，但是钙是否被体内吸收却是问题的关键。增强骨密度是骨细胞的成骨过程，作为成骨的原料需要可被体内迅速吸收的钙，还需要补充作为骨基质胶原蛋白，以及促进钙吸收与利用的细胞因子——成骨肽。我们从美国引进最新研究成果，合作开发了新型防骨质疏松补钙产品。它采用现代生物提取技术，从新鲜洋葱中提取成骨肽——丙谷胱肽（γ-L-glutamyl-trans-S-1-propenyl-L-cysteine sulfoxide，GPCS）。丙谷胱肽为小分子寡肽，寡肽最大的优点就是易于人体吸收，而且洋葱成骨肽增加骨密度的这一功效起效快。丙谷胱肽是由丙酰、谷氨酰、半胱氨酰基组成的三肽，是促钙吸收剂，动物实验证明，从洋葱提取的丙谷胱肽能增加骨密度，比单纯补钙高达33%［Li,F.&Mühlbauer,R.C.J.Bone Miner.Res.14,1457–1465(1999).］。

目前对于洋葱有效成分提取方法的发明专利多涉及洋葱挥发油类物质的提取，尚无涉及洋葱成骨肽提取方法的专利。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够防骨质疏松的洋葱成骨肽——丙谷胱肽的提取方法，该提取方法能够高效、高质、无污染地提取洋葱成骨肽。

如未特殊说明，本发明所有比例关系均为体积比。

本发明具体提供了一种洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于：所述方法为采用低温醇提工艺，制得洋葱多肽粗提浸膏，将浸膏依次经大孔树脂色谱法、硅胶色谱法、Sephadex LH20色谱法分离提纯，得到含有洋葱成骨肽的多肽精提物，再经冷冻干燥制得干粉保存。

本发明所述洋葱成骨肽的提取方法，其特征在于，具体步骤为：

A）、取新鲜洋葱，洗净、切块、低温干燥、粉碎；

B）、对洋葱粉进行醇提得浸膏；

C）、将浸膏用2～3倍水溶解，然后用与水同体积的有机溶剂萃取2～4次，浓缩水溶液得到洋葱多肽粗提物1；

D）、将洋葱多肽粗提物1上大孔树脂色谱柱后，用50%乙醇洗脱至柱无色，洗脱液减压回收乙醇得洋葱多肽粗提物2，其中大孔树脂为非极性或弱极性聚苯乙烯大孔树脂；

E）、将洋葱多肽粗提物2上硅胶色谱柱后，用体积比为CHCL₃：MeOH：H₂O=7:3:0.5的洗脱液梯度洗脱，流速为2～3ml/分钟，收集薄层色谱紫外光检测R_f为0.5～0.6的洗脱液，减压回收洗脱液得洋葱多肽粗提物3；

F）、将洋葱多肽粗提物3上Sephadex LH20凝胶色谱柱，用CH₃OH：H₂O=1:1的洗脱液洗脱，流速为1～2ml/分钟，收集薄层色谱紫外光检测R_f为0.55的洗脱液，减压浓缩得洋葱多肽精提物，所述Sephadex LH20为羟丙基葡聚糖凝胶；

G）、洋葱多肽精提物经冷冻干燥制得干粉保存。